护骨素对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

摘要：

目的 探讨护骨素(OPG)对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及可能机制.方法 将HUVECs细胞分为3组:正常对照组:以0.4％牛血清白蛋白处理；软脂酸组:以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组:以不同浓度OPG预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸(OPG浓度分别为50、100、200、400 μg/L),以上各组细胞培养24h,流式细胞术及Hoechst 33258核染色检测细胞凋亡.将HUVECs细胞分为5组:正常对照组:以0.4％牛血清白蛋白处理；软脂酸组:以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组:以400 μg/L OPG预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸± OPG±雷帕霉素组:以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h,再给予400 μg/L OPG处理24 h,最后加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸±雷帕霉素组:以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸.以Western blotting法分析各组HUVECs细胞马铃薯球蛋白(tuberin)、磷酸化马铃薯球蛋白(P-tuberin)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)、磷酸化核糖体蛋白S6激酶(P-S6K)、Bcl-2、Bax以及caspase 3蛋白表达水平.组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK法.结果 与正常对照组比较,软脂酸组早期细胞凋亡率显著增加(18.31％ ±0.51％比6.88％±0.60％,P＜0.05)；OPG组早期凋亡率(12.58％ ±0.19％、9.39％±0.42％、7.55％±0.17％、5.90％±0.14％)明显低于软脂酸组(均P ＜0.05),且呈OPG剂量依赖性；与正常对照组比较,软脂酸组晚期凋亡率显著增加(9.55％±0.22％比5.28％±0.90％,P ＜0.05)；OPG组晚期凋亡率(7.71％±0.17％、6.42％±0.18％、5.24％±0.16％、4.50％±0.16％)明显低于软脂酸组(均P＜0.05),且呈OPG剂量依赖性.与正常对照组比较,软脂酸组P-tuberin/tuberin(2.0942±0.0163比1.1948±0.0541)、P-S6K/S6K(2.0942 ±0.0163比3.2052±0.0051)、Bax/β-actin(0.3868±0.0013比1.2991 ±0.0026)、caspase 3/β-actin(0.2346±0.0009比0.5793±0.0103)表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(均P＜0.05),Bcl-2/β-actin表达显著降低(0.2470 ±0.0038比0.0716 ±0.0004,P＜0.05)；OPG组P-tuberin/tuberin(0.8258 ±0.0074)、P-S6K/S6K(2.5073 ±0.1403)、Bax/β-actin(0.7452 ±0.0045)、caspase 3/β-actin(0.4713 ±0.0066)表达水平明显低于软脂酸组(均P＜0.05),Bcl-2/β-actin(0.1909±0.0021)表达明显高于软脂酸组(P＜0.05).结论 OPG对软脂酸诱导的HUVECs凋亡具有保护作用,此作用可能通过下调tuberin/mTOR活性,增加Bcl-2表达、降低Bax及Caspase 3表达实现的.

关键词：护骨素、软脂酸、人脐静脉内皮细胞、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物

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资助基金：湖北省自然科学基金重点项目2011CDA002;湖北省科学技术研究与开发资金项目2009CDB427;武汉市学科带头人计划201271130459

在线出版日期：2013-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：168-173