脂多糖对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响

摘要：

目的 研究脂多糖(LPS)对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响及其可能机制.方法 取处于对数期生长的INS-1细胞用于实验,分别用0.1、1.0、10.0 mg/L LPS处理细胞,24h后用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测LPS对INS-1细胞增殖的影响,用二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)作为荧光探针检测细胞内活性氧的水平变化,应用Western blotting法检测细胞自噬体膜上自噬标志分子微管相关蛋白1的轻链3-Ⅱ( Map1LC3 -Ⅱ)和凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸·核糖多聚酶(PARP)切割带的变化.将INS-1细胞的自噬必需基因7(Atg7)通过siRNA介导的RNA干扰手段进行沉默,然后以1.0 mg/L LPS处理细胞,24h后应用Western blotting检测细胞中Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割带的水平.先用400 μmol/L的活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理INS-1细胞,1h后加入10.0 mg/L的LPS,24h后应用Western blotting法检测细胞Map1LC3-Ⅱ蛋白和PARP切割蛋白的水平.组间数据比较采用方差分析和t检验.结果 与对照组(0.755±0.030)比较,0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组INS-1存活率降低,差异有统计学意义(分别为0.658±0.042、0.658±0.015、0.634±0.029,F=30.98,P＜0.01);与对照组(0.447±0.012)相比,0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组Map1 LC3 -Ⅱ蛋白水平增加,差异有统计学意义(分别为0.992±0.030、0.949±0.020、0.982±0.013,F=525.79,P＜0.01);与对照组(0.055±0.001)相比,0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组PARP切割蛋白水平增加,差异有统计学意义(分别为0.313±0.007、0.390±0.011、0.500±0.033,F=327.09,均P＜0.01);与对照组比较,10 mg/L LPS组活性氧产生明显增多.与对照组比较,转染Atg7 siRNA组Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义(t=156.069、123.154、103.246,均P＜0.01).与LPS 10.0 mg/L组比较,LPS 10.0 mg/L+ NAC组Map1LC3 -Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义(t=66.37、26.84,均P＜0.01).结论 LPS可诱导INS-1细胞的自噬和凋亡,且其所诱导的凋亡依赖于自噬的发生;活性氧参与了LPS诱导的INS-1细胞的自噬和凋亡.

关键词：胰岛素瘤细胞INS-1、脂多糖、自噬、凋亡、大鼠

所属期刊栏目：04

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

在线出版日期：2012-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：296-300