腺病毒介导的过氧化物酶增殖激活受体-δ小发夹状RNA对胰岛细胞瘤细胞脂代谢的影响

摘要：

目的 构建小发夹状RNA(shRNA)腺病毒沉默过氧化物酶增殖激活受体-δ(PPAR-δ)表达,探讨PPAR-δ在大鼠胰岛细胞瘤细胞(INS-1)脂代谢中的作用和地位.方法 用限制性内切酶Sal Ⅰ和HindⅢ将shRNA质粒pGenesil-1载体中的PPAR-δ-shRNA片段连同U6启动子一起切下,连接至线性化的穿梭质粒pAdtrack-CMV上,将pAdtrack-CMV与骨架质粒pAdeasy在腺病毒载体电转感受态细菌(BJ5183)中重组得到PPAR-δ-shRNA腺病毒重组质粒.限制性内切酶Pac Ⅰ线性化重组质粒后用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000转染人胚肾细胞(HEK293),包装得到含PPAR-δ-shRNA的病毒重组子,病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,将收集的病毒液感染INS-1细胞、RT-PCR和Western blot检测PPAR-δ蛋白的表达.RT-PCR检测该病毒对INS-1细胞脂代谢相关基因酰基辅酶A氧化酶(ACO)、肉毒碱棕榈酸转移酶1(CPT1)、脂肪酸转运蛋白1(FATP1)、长链酰基辅酶A脱氢酶(LCAD)表达的影响,并检测INS-1细胞内甘油三酯含量的变化.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析,组间差异采用方差分析.结果 成功构建了含有大鼠PPAR-δ-shRNA基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1×1010PFU/ml.重组腺病毒感染后INS-1细胞PPAR-δ mRNA和蛋白表达明显下降.与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使ACO的表达下降40%(分别为0.72±0.05,0.44±0.07,P＜0.05),CPT1表达下降27%(分别为0.66±0.08,0.48±0.02,P＜0.05),使FATP1的表达下降55%(分别为0.65±0.07,0.30±0.02,P＜0.05),使LCAD的表达下降32%(分别为0.66±0.12,0.45±0.10,P＜0.05).与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使INS-1细胞内甘油三酯含量上升65%(分别为5.27±0.19,8.68±0.34,P＜0.05).结论 成功构建了PPAR-δ-shRNA腺病毒,该腺病毒能够抑制INS-1细胞的脂肪酸氧化,促进细胞内脂质沉积.

关键词：过氧化物酶增殖激活受体-δ、腺病毒、脂代谢、胰岛细胞

所属期刊栏目：03

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2011-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：161-166