新型HIV-1核酸定量内标构建及验证

摘要：

目的 构建一种稳定的以病毒颗粒为基础的HIV核酸定量检测内标.方法 在实验室原有新型表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol的基础上,利用PCR扩增法在不改变p24保守区基础上突变核苷酸,经Gateway重组得到含突变碱基的pNL43-?ENV-LUC-ATTR表达载体,该载体与水泡性口膜炎病毒(VSV)质粒共转染293细胞48 h后收集上清中HIV-1内标假病毒颗粒,检测p24抗原含量,定量假病毒滴度,以倍比稀释内标质粒、内标质粒与阳性标本混合品、内标假病毒颗粒与阳性标本混合品为模板进行实时定量PCR法,观察内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针的匹配情况,以及是否受样本探针引物的干扰.结果 定点突变表型耐药载体pcDNA6.2-LTR gagpol内的p24保守区片段;获得仅具有1次感染性的HIV-1假病毒颗粒(3.61×109 IU/ml);p24抗原检测含量为283.2 pg/ml;实时定量PCR法确定内标质粒、内标假病毒颗粒内的核酸与内标引物探针匹配良好,内标引物探针对阳性标本探针无干扰.结论 成功建立了一种以假病毒颗粒为基础的HIV-1核酸定量检测内标.

关键词：获得性人类免疫缺陷病毒1型、核酸定量、病毒颗粒、内标

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分类号：R44;R73

资助基金：首都卫生发展科研专项项目首发2014-1-1151;北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划2013-3-072

在线出版日期：2017-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：20-26