应用HBV-Alu-PCR研究肝癌细胞株中乙型肝炎病毒整合

摘要：

目的 探讨常见肝癌细胞株中整合的乙型肝炎病毒(HBV)序列和整合位点.方法 分别将来源于HBV感染者的肝癌细胞株(MHCC97H、MHCC97L、MHCCLM3和PLC/PRF/5),稳定转染HBV的肝癌细胞株(HepG2.2.15、HepAD38和DE19),和无HBV感染者来源的肝癌细胞株(HepG2、HuH-7)培养72 h,检测培养上清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)及HBV DNA滴度.采用HBV-Alu-PCR方法,扩增肝癌细胞株中整合的HBV基因X/C/S片段及其侧翼的人基因组DNA片段,对扩增片段进行测序确定HBV整合在人类染色体的精确位置,并用生物信息学分析确定其上下游基因.结果 MHCC97H、MHCC97L和MHCCLM3未检出HBsAg和HBeAg,但HBV DNA滴度为2.00 × 105~4.00 × 105IU/ml;HepG2.2.15、HepAD38、DE19和PLC/PRF/5 HBsAg阳性,且HBV DNA滴度> 5.00 ×105IU/ml,其中HepG2.2.15、HepAD38HBeAg阳性;HepG2、HuH-7 HBsAg、HBeAg和HBV DNA均低于检测下限.除HepG2和HuH-7未检测到整合外,其余细胞株中可检测到1个或多个整合的不同HBV亚基因组片段:HepG2.2.15检测到5个HBx和HBc整合片段,HepAD38和PLC/PRF/5各检测到2个HBx整合片段,DE19检测到一个HBc整合片段.3个MHCC97的衍生细胞株:MHCC97L(低转移潜能肝癌细胞)、MHCC97H(高转移潜能肝癌细胞)和MHCCLM3(MHCC97H肺转移肝癌细胞)检测到完全相同的HBc片段整合在16q13上IRX3和IRX5基因之间的非编码区.此外,各细胞株HBV整合位点上下游的基因主要包括肿瘤相关基因,核糖体蛋白编码基因和钙信号相关基因.结论 HBV感染者来源和稳定转染HBV的肝癌细胞株存在HBV整合;HBV基因X/C片段比S片段有更高的整合频率;同一个克隆来源的肝癌细胞株的HBV整合位点稳定,提示HBV整合分析可能对肝细胞癌原发灶和转移灶癌细胞克隆来源的鉴定提供参考.

关键词：肝炎病毒、乙型、肝癌细胞株、病毒整合

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分类号：R73;S82

资助基金：国家重大科技专项2008ZX10002-019;国家自然科学基金91029741, 81001072,81273202;江苏省临床医学科技专项BL2013024

在线出版日期：2015-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：708-713