FAM172A及其异构体重组蛋白对体外培养肝细胞增殖的影响

摘要：

目的体外克隆人类基因FAM172A，构建其原核表达载体并诱导其重组蛋白的表达，制备兔抗FAM172A重组蛋白的多克隆抗体，观察其在不同细胞系的表达情况。观察FAM172A-1和FAM172A-3蛋白对L02细胞增殖的影响。方法利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及PCR技术，构建原核表达质粒pET-32a（＋）-FAM172A-1和pET-32a（＋）-FAM172A-3。诱导该基因不同异构体重组蛋白的表达，并通过蛋白质免疫印迹（Western blot）技术进行鉴定。纯化后的重组蛋白FAM172A-1和FAM172A-3与肝细胞L02细胞共孵育，观察不同浓度的重组蛋白对细胞增殖的影响。利用纯化后的FAM172A（异构体3）重组蛋白免疫大耳白兔，获得抗FAM172A-3蛋白的多克隆抗体，利用酶联免疫吸附法（ELISA）以及Western blot技术对获得的多克隆抗体进行效价分析及特异性检测。结果成功扩增获得FAM172A（异构体1、3）的基因片段，测序结果与GenBank已公开的基因序列一致；成功表达FAM172A（异构体1、3）的重组蛋白，经过Western blot鉴定正确；纯化后的重组蛋白FAM172A （异构体1、3）与L02细胞共孵育结果发现，两者对L02细胞在一定浓度范围内均有促进细胞增殖的作用。所制备的兔抗人FAM172A-3重组蛋白的多克隆抗体，ELISA检测显示其效价可达1︰1280000， Western blot检测证实该多克隆抗体的特异性良好；Western blot分析显示，该蛋白在肝脏间质细胞和实质细胞均有一定程度的表达。结论 FAM172A蛋白在肝实质细胞及肝间质细胞均表达，且其重组蛋白可以促进L02细胞增殖，推测该基因可能与肝细胞损伤、肝纤维化以及肝细胞再生等发生机制有关。

关键词：FAM172A基因、多克隆抗体、肝细胞、细胞增殖

分类号：R57;R73

资助基金：国家自然科学基金81071411，81271901

在线出版日期：2013-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：325-331