去甲肾上腺素对小鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响及其机制

摘要：

目的:探讨交感神经递质去甲肾上腺素(NE)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移的影响及其机制。方法:(1)取20只3周龄雄性C57BL/6小鼠，处死后取出股骨和胫骨，分离培养BMSC并鉴定。取第2代或3代细胞，分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、1 μmol/L NE组、10 μmol/L NE组及100 μmol/L NE组，每组8孔。1 μmol/L NE组、10 μmol/L NE组及100 μmol/L NE组细胞分别在含体积分数1%胎牛血清的低糖DMEM培养基(以下简称低血清培养基)内分别加入终物质的量浓度为1、10、100 μmol/L的NE培养，PBS组细胞在低血清培养基内加入等体积的PBS培养。在刺激前(0 d)及刺激1、3、5 d，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖活性(以吸光度值表示)。(2)细胞划痕试验1中，取细胞分为PBS组和单纯NE组，行划痕试验后，单纯NE组细胞采用低血清培养基＋终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养，PBS组细胞采用低血清培养基＋等体积PBS培养。细胞划痕试验2中，取细胞分为PBS组、普萘洛尔＋NE组、酚妥拉明＋NE组，行划痕试验后，普萘洛尔＋NE组细胞每天采用低血清培养基＋终物质的量浓度为1 μmol/L的普萘洛尔、酚妥拉明＋NE组细胞每天采用低血清培养基＋终物质的量浓度为10 μmol/L的酚妥拉明预处理30 min后，均再采用低血清培养基＋终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养；PBS组采用低血清培养基＋等体积PBS培养。细胞划痕试验3中，取细胞分为单纯NE组、单纯(2E，6E)-2，6-二(4-吡啶基亚甲基)环己酮(SC-66)组、SC-66＋NE组，行划痕试验后，单纯NE组采用低血清培养基＋终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养；单纯SC-66组细胞每天采用终物质的量浓度为30 mmol/L的SC-66预处理30 min后，再采用低血清培养基培养；单纯SC-66＋NE组每天采用终物质的量浓度为30 mmol/L的SC-66预处理30 min后，再采用低血清培养基＋终物质的量浓度为10 μmol/L的NE培养。以上3个细胞划痕试验，每组样本数均为6，均计算划痕后24、48、72 h的划痕愈合率。(3)取细胞分为PBS组、单纯NE组、普萘洛尔＋NE组、酚妥拉明＋NE组，每组3孔，PBS组、单纯NE组下室处理分别同细胞划痕试验1相同组，普萘洛尔＋NE组和酚妥拉明＋NE组下室处理分别同细胞划痕试验2相同组，行Transwell实验。常规培养24 h后，计数迁移细胞。(4)取细胞分为PBS组、单纯NE组、普萘洛尔＋NE组、酚妥拉明＋NE组，每组2皿，PBS组、单纯NE组细胞处理分别同细胞划痕试验1相同组，普萘洛尔＋NE组和酚妥拉明＋NE组细胞处理分别同细胞划痕试验2相同组。常规培养24 h后，采用蛋白质印迹法检测细胞蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本
t检验、LSD-
t检验、Bonferroni校正。
结果:(1)刺激1 d，100 μmol/L NE组细胞吸光度值明显低于PBS组(
t＝2.986，
P<0.05)；刺激5 d，10 μmol/L NE组细胞吸光度值明显高于PBS组(
t＝3.547，
P<0.01)。(2)细胞划痕试验1中，划痕后24、48、72 h，单纯NE组细胞划痕愈合率分别为(34.4±3.4)%、(52.5±4.7)%、(70.0±3.8)%，明显低于PBS组的(44.1±4.2)%、(80.0±3.6)%、(95.9±2.2)%(
t＝19.320、128.319、221.575，
P<0.01)。细胞划痕试验2中，划痕后24、48、72 h，普萘洛尔＋NE组细胞划痕愈合率均明显低于PBS组(
t＝4.073、9.618、15.272，
P<0.01)。细胞划痕试验3中，划痕后72 h，单纯NE组细胞划痕愈合率明显低于单纯SC-66组(
t＝8.862，
P<0.01)；划痕后24、48、72 h，SC-66＋NE组细胞划痕愈合率均明显低于单纯SC-66组(
t＝3.862、4.290、10.357，
P<0.01)。(3)Transwell实验显示，培养24 h，单纯NE组、普萘洛尔＋NE组及酚妥拉明＋NE组细胞迁移数量均明显少于PBS组(
t＝11.895、10.196、3.222，
P<0.01)。(4)培养24 h后，与PBS组比较，单纯NE组、普萘洛尔＋NE组细胞Akt磷酸化水平明显升高(
t＝8.186、5.996，
P<0.01)。
结论:NE可抑制小鼠BMSC迁移，Akt信号通路参与了此调控过程。

关键词：去甲肾上腺素、间充质干细胞、细胞迁移分析

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1173-1182