缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制

摘要：

目的 探讨缺氧诱导因子1 α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制. 方法 取12只雄性SD大鼠,35 ～ 38 d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验.(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔.阴性对照组和HIF-1 α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000.转染24 h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1 α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列.(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔.空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒.培养14 d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平.(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔.空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1 α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1 α高表达重组质粒.培养14 d,检测各组细胞HIF-1 α的mRNA和蛋白表达水平.(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平.对数据行单因素方差分析、t检验. 结果 培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞.(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66％、45.79％、62.62％,干扰序列3组细胞干扰效率最高.转染24 h后,HIF-1 α干扰序列3组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=18.404、9.140,P＜0.01)及阴性对照组(t=15.099、7.096,P＜0.01).(2)培养14 d后,HIF-1α低表达组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=21.140、5.440,P＜0.01)和阴性对照组(t=14.310、5.210,P＜0.01).(3)培养14d后,HIF-1 α高表达组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显高于空白对照组(t=19.160,7.710,P＜0.01)及阴性对照组(t=19.890、7.500,P＜0.01).(4)转染24 h后,HIF-1α低表达组细胞MLCK、p-MLC的mRNA表达水平显著低于空白对照组(t=2.709、4.011,P＜0.05或P＜ 0.01)和阴性对照组(t=2.373、3.744,P＜0.05或P＜0.01),HIF-1α低表达组细胞ZO-1的mRNA表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(t=4.285、5.050,P＜0.01).HIF-1α高表达组细胞MLCK、p-MLC的mRNA表达水平显著高于空白对照组(t=9.118、11.313,P＜0.01)和阴性对照组(t=9.073、11.280,P＜0.01),HIF-1 α高表达组细胞ZO-1的mRNA表达水平显著低于空白对照组和阴性对照组(t=2.889、2.640,P＜0.05).(5)转染24 h后,HIF-1α低表达组细胞MLCK、p-MLC的蛋白表达水平显著低于空白对照组(t=2.652、3.983,P＜0.05或P＜0.01)和阴性对照组(t=2.792、4.065,P＜0.05或P＜0.01),HIF-1α低表达组细胞ZO-1的蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组(t=3.881、3.570,P＜0.01).HIF-1α高表达组细胞MLCK、p-MLC的蛋白表达水平为1.18士0.24、0.68±0.22,显著高于空白对照组的0.41±0.21、0.35±0.14(t=5.011、3.982,P ＜0.05或P＜0.01)和阴性对照组的0.43±0.20、0.36 ±0.12(t=4.880、3.862,P＜0.05或P＜0.01).HIF-1α高表达组细胞ZO-1的蛋白表达水平为0.08±0.06,显著低于空白对照组的0.20±0.09和阴性对照组的0.19±0.09(t=4.178、3.830,P＜0.05或P＜0.01). 结论 HIF-1α通过上调MLCK、p-MLC,下调ZO-1的表达,从而增加大鼠血管内皮细胞通透性.

关键词：缺氧诱导因子、α亚基、血管、通透性、内皮细胞、肌球蛋白轻链激酶、磷酸化肌球蛋白轻链、带状闭合蛋白1

所属期刊栏目：35

资助基金：安徽省自然科学基金1508085SMH231;安徽省重点研究与开发计划1804h08020230Natural Science Foundation of Anhui Province of China1508085SMH231;Key Research and Development Plan of Anhui Province of China1804h08020230

在线出版日期：2019-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：209-217