载N-(4-羟基苯基)维甲酰胺脂质微泡联合超声对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

摘要：

目的 探讨载N-(4-羟基苯基)维甲酰胺(4HPR)及4HPR脂质体(4HPR-L)与4HPR脂质微泡(4HPR-LM)联合超声对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Fb)增殖、凋亡及细胞周期的影响. 方法 (1)采用水化超声法制备4HPR-L及4HPR-LM,采用高效液相色谱法、动态光散射法、透射电镜对4HPR-L外观形态、粒径分布、Zeta电势、载药浓度、包封率、载药量进行考察.(2)取人瘢痕疙瘩Fb,采用随机数字表法(分组方法下同)分为13组,每组6孔.对照组细胞不给予任何处理,0.5 W30s组、0.5 W60s组、0.5 W 120s组、0.7W30s组、0.7 W60s组、0.7W 120s组、1.0W30s组、1.0W60 s组、1.0W120s组、1.5W30s组、1.5W60s组、1.5 W 120s组12个超声组细胞分别给予对应参数超声处理.常规培养24 h后,酶标仪测定细胞活力.另取人瘢痕疙瘩Fb,分为5组,每组6孔.对照组细胞不给予任何处理,1、10、20、50 μg/mL空白脂质微泡组细胞给予对应质量浓度的空白脂质微泡处理,常规培养24 h后同前测定细胞活力.另取人瘢痕疙瘩Fb,分为6组,每组12孔.对照组细胞不给予任何处理,1、10、20、50、100 μg/mL 4HPR-L组细胞分别加入含对应质量浓度4HPR的4HPR-L处理,常规培养24、48 h后每组各取6孔同前测定细胞活力.另取人瘢痕疙瘩Fb,分为4组,每组6孔.对照组细胞不给予任何处理,4HPR组、4HPR-L组和4HPR-LM+超声组细胞分别加入4HPR、4HPR-L、4HPR-LM(4HPR质量浓度均为20 μg/mL)处理,4HPR-LM+超声组细胞给药后立即给予0.5 W60s超声处理.常规培养24 h后同前测定细胞活力.(3)取人瘢痕疙瘩Fb,分为对照组、4HPR组、4HPR-L组和4HPR-LM+超声组,每组3孔,各组细胞处理同前.常规培养24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.(4)取人瘢痕疙瘩Fb,同(3)分组及处理,常规培养24 h后流式细胞仪检测细胞周期分布情况.对数据行单因素方差分析和t检验. 结果 (1)4HPR-L颗粒呈大小均匀的球形或类球形结构,粒径为(100.1±1.3)nm,Zeta电势为(-34.3 ±2.3)mV.4HPR-L溶液中4HPR质量浓度在1400 μg/mL左右,包封率为(95.8±1.2)％,载药量为(8.3±0.4)％.(2)12个超声组细胞活力均高于93.0％.1、10、20、50 μg/mL空白脂质微泡组细胞活力均高于95.0％.1μg/mL4HPR-L组细胞给药24、48 h细胞活力相近(t=0.393,P＞0.05),给药24 h时10、20、50、100 μg/mL4HPR-L组细胞活力明显高于给药48 h(t=44.593、22.961、32.224、35.337,P＜0.01).4HPR组、4HPR-L组与4HPR-LM+超声组给药24 h细胞活力分别为(47.3±0.7)％、(42.3±1.7)％、(38.6±0.8)％.4HPR组细胞活力明显高于4HPR-L组和4HPR-LM+超声组(t=4.551、15.895,P＜0.05或P ＜0.01),4HPR-L组细胞活力明显高于4HPR-LM+超声组(t=-3.360,P＜0.05).(3) 4HPR组、4HPR-L组与4HPR-LM+超声组总凋亡细胞百分比分别为(32.8±2.4)％、(42.5±2.4)％、(58.5±6.3)％,明显高于对照组的(14.9±1.6)％(t=8.748、13.637、9.500,P＜0.01);4HPR-L组与4HPR-LM+超声组总凋亡细胞百分比明显高于4HPR组(t=4.049、5.393,P＜0.05或P ＜0.01);4HPR-LM+超声组总凋亡细胞百分比明显高于4HPR-L组(t=3.371,P＜0.01).(4)4HPR组G2/M期细胞百分比高于对照组,但差异无统计学意义(t =2.107,P＞0.05);4HPR-L组G2/M期细胞百分比明显高于4HPR组和对照组(t=18.169、30.026,P＜0.01);4HPR-LM+超声组G2/M期细胞百分比明显高于4HPR-L组、4HPR组和对照组(t=4.932、25.854、66.231,P＜0.01).结论 4HPR可抑制人瘢痕疙瘩Fb增殖、诱导细胞凋亡及发生G2/M期阻滞,且4HPR-LM联合超声的作用效果优于4HPR-L和游离4HPR.

关键词：瘢痕疙瘩、成纤维细胞、脂质体、超声处理、N-(4-羟基苯基)维甲酰胺、微泡

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资助基金：吉林省科技发展计划20160101183JC;Science and Technology Development Plan of Jilin Province of China20160101183JC

在线出版日期：2018-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：683-689