变性Ⅰ型胶原在人成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中的作用

摘要：

目的 探讨变性Ⅰ型胶原在人成纤维细胞(Fb)向肌Fb分化中的作用. 方法 取烧伤瘢痕手术患者捐献的少量正常皮肤,组织块培养法获得人Fb,并进行传代培养,取第4代细胞进行以下实验.(1)取Fb,按随机数字表法分为正常胶原组和变性胶原组,每组10孔.正常胶原组Fb接种于正常Ⅰ型胶原包被的盖玻片,变性胶原组Fb接种于变性Ⅰ型胶原包被的盖玻片.免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达,计算PCNA表达阳性细胞百分比.(2)另取Fb,同(1)进行分组处理,每组12孔,噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性.(3)另取Fb,同(1)进行分组处理,罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞微丝形态.(4)另取Fb,同(1)进行分组处理,免疫组织化学法检测细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,免疫荧光法检测细胞中OB钙黏蛋白表达.(5)另取Fb,按随机数字表法分为正常胶原组、变性胶原组和普通玻片组,每组6孔.正常胶原组和变性胶原组Fb处理同(1),普通玻片组Fb接种于无胶原包被的盖玻片.蛋白质印迹法检测细胞中α-SMA和OB钙黏蛋白表达.(6)另取Fb,同(5)进行分组处理,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应法检测细胞中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原及α-SMA的mRNA表达.对数据行t检验、单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)变性胶原组PCNA表达阳性细胞百分比为(83±9)％,明显高于正常胶原组的(29±9)％(t=13.53,P＜0.01).(2)变性胶原组Fb的增殖活性为0.32 ±0.06,明显高于正常胶原组的0.25 ±0.05(t=3.06,P＜0.01).(3)正常胶原组Fb微丝均纵向平行排列,贯穿细胞长轴.变性胶原组Fb微丝更为密集、粗大.(4)正常胶原组Fb基本呈典型的长梭形;变性胶原组Fb形态发生变化,细胞明显铺展.变性胶原组Fb的α-SMA、OB钙黏蛋白表达较正常胶原组强.(5)变性胶原组、正常胶原组、普通玻片组Fb的α-SMA表达量分别为1.69 ±0.41、0.89 ±0.27、1.46 ±0.42,变性胶原组Fb的α-SMA表达量明显高于正常胶原组(P＜0.01).变性胶原组、正常胶原组、普通玻片组Fb的OB钙黏蛋白表达量分别为5.17 ±0.28、2.21 ±0.10、4.01 ±0.56,变性胶原组Fb的OB钙黏蛋白表达量明显高于正常胶原组(P＜0.01).(6)正常胶原组、变性胶原组与普通玻片组Fb中Ⅰ型胶原的mRNA表达量相近(F =2.71,P＞0.05).正常胶原组Fb中Ⅲ型胶原及α-SMA的mRNA表达量明显低于变性胶原组(p＜0.01). 结论 变性Ⅰ型胶原影响Fb活性,诱导Fb向肌Fb分化.

关键词：瘢痕、成纤维细胞、细胞增殖、胶原Ⅰ型、胶原Ⅲ型、变性胶原

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资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2012CB518105;国家自然科学基金81071567、30872686、81000838;National Basic Research Program of China 973 Program2012CB518105;National Natural Science Foundation of China81071567,30872686,81000838

在线出版日期：2018-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：96-101