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摘要: 目的 探讨姜黄素是否通过激活自噬保护帕金森病(PD)多巴胺能(DA)神经元及其激活自噬的具体机制. 方法 采用1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子(MPP+)处理人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;同时采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射C57BL/6雄性小鼠建立PD动物模型;细胞及小鼠分别分为正常对照组、模型组、姜黄素组、姜黄素+3-MA组、3-MA组.姜黄素组、姜黄素+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和3-MA组细胞在Mpp+处理的同时分别将姜黄素(40 μmol/L)、姜黄素(40 μmol/L)+3-MA(4 mmol/L)、3-MA(4 mmol/L)添加于培养基中孵育.姜黄素组、姜黄素+3-MA组、3-MA组小鼠在MPTP腹腔注射的同时分别予姜黄素(80mg/kg)、姜黄素(80 mg/kg)+3-MA(2 mg/kg)、3-MA(2 mg/kg)腹腔注射,1次/d.正常对照组同时腹腔注射无菌生理盐水(30 mL/kg).各组细胞在药物处理48 h后分别进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫荧光染色.采用Western blotting实验检测α-突触核蛋白(α-Syn)、自噬相关蛋白溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达,并分离核浆蛋白测定核转录因子EB(TFEB)蛋白在胞浆和胞核中的表达;采用RT-PCR检测α-Syn mRNA表达.各组小鼠在最后1次药物注射后14d时处死取中脑黑质脑组织行TH免疫组化染色.采用Western blotting实验检测α-Syn和LC3的蛋白表达. 结果 (1)与模型组比较,姜黄素组细胞和小鼠中脑黑质TH阳性细胞数目增多(即DA神经元存活数目增多),细胞内α-Syn蛋白及mRNA表达减少,小鼠中脑α-Syn蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05).同时,姜黄素组细胞内自噬蛋白LAMP2A和LC3-Ⅱ表达增加,小鼠中脑LC3-Ⅱ蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)与姜黄素组比较,姜黄素+3-MA组细胞及小鼠中脑黑质DA神经元存活数目减少,细胞内α-Syn蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)与模型组比较,姜黄素组细胞胞核内TFEB表达显著增加,姜黄素+3-MA组细胞胞浆TFEB表达显著增加,胞核表达显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 姜黄素具有保护DA神经元功能,激活细胞自噬功能从而促进α-Syn的自噬性清除是其主要作用机制之一,增加TFEB表达、促进TFEB向细胞核内转移行使转录功能继而促进自噬溶酶体合成可能是其激活细胞自噬功能的主要途径.
关键词: 帕金森病、姜黄素、自噬、α-突触核蛋白、核转录因子EB
所属期刊栏目: 17
分类号: R742.5(神经病学与精神病学)
资助基金: 浙江省中医药科技计划项目优秀青年人才基金项目2015ZQ017浙江省自然科学基金青年基金项目LQ17H280003浙江省医药卫生科技计划2014KYB181Traditional Chinese Medical technology Planning Project of Zhejiang Province Excellent Youth Foundation2015ZQ017;Natural Science Foundation of Zhejiang Province Youth FoundationLQ17H280003;Medical Technology Planning Project of Zhejiang Province2014KYB181
在线出版日期: 2018-12-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
页数: 共8页
页码: 973-980
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