慢病毒介导磷酸二酯酶5基因修饰对大鼠脂肪干细胞效能的影响

摘要：

目的 探讨慢病毒介导的磷酸二酯酶5(PDE5)基因抑制对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响及其可能机制. 方法 (1)分离纯化大鼠ADSCs,传代培养及鉴定.构建沉默PDE5基因不同位点的3组PDE5慢病毒表达载体(PDE5 shRNA1、PDE5 shRNA2、PDE5 shRNA3)并设置阴性对照(NC shRNA),采用慢病毒包装系统稳定转染ADSCs,应用RT-PCR检测ADSCs PDE5 mRNA表达,应用Western blotting检测ADSCs PDE5蛋白表达,以筛选出最高效的转染细胞株.(2)实验分为4组:正常细胞组、缺血-复氧(I/R)损伤细胞组(正常细胞+I/R损伤)、阴性对照组(NC shRNA-ADSCs+I/R损伤)、PDE5 shRNA-ADSCs+I/R损伤组(PDE5 sh I/R组).采用CCK-8法及Edu法检测各组细胞24 h、48 h增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(FGF)及细胞内环磷鸟苷(cGMP)水平.结果 成功构建了PDE5慢病毒表达载体,筛选并成功建立了稳定低表达PDE5基因的ADSCs细胞株PDE5 shRNA-ADSCs.与正常细胞组相比,I/R损伤细胞组ADSCs增殖率明显降低,早期、晚期及总凋亡率均明显增加,上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组与I/R损伤细胞组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);而与阴性对照组相比,PDE5 sh I/R组ADSCs增殖显著增加,凋亡率明显下降,且上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平进一步升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 PDE5基因表达被抑制后可能通过上调cGMP水平,有效改善ADSCs在I/R状态下的增殖、凋亡及分泌功能,优化其效能.

关键词：脂肪干细胞、磷酸二酯酶5、缺血-复氧损伤、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：14

分类号：R329.2+8(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金81301613

在线出版日期：2015-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1081-1088