miR-16通过调控NF-κB1/MMP-9信号通路抑制胶质瘤侵袭的实验研究

摘要：

目的 探讨miR-16、核转录因子-κB1(NF-κB1)在人脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤细胞株SHG44、U87和U373侵袭生长的相关性. 方法 (1)收集苏州大学第一附属医院神经外科自2000年1月至2011年1月手术切除的29例胶质瘤组织和同期行减压术切除的6例正常脑组织标本,qRT-PCR检测标本miR-16、NF-κB1的表达.(2)将体外培养的U87、U373和SHG44细胞分为空白组、无义序列转染组,miR-16模拟物转染组,分别转染miR-16无义序列和miR-16模拟物,48 h后qRT-PCR检测细胞miR-16、NF-κB1的表达;Transwell实验检测细胞侵袭能力;72 h后Western blotting检测细胞NF-κB1、基质金属蛋白酶(MMP)-9和MMP-2蛋白的表达.(3)荧光素酶实验检测miR-16对NF-κB1基因的靶向调控作用.(4)以U87细胞作为阴性对照组,构建稳定表达miR-16的U87细胞株并建立颅内肿瘤、皮下肿瘤裸鼠模型(U87-miR-16组),免疫荧光、免疫组化分别检测2组裸鼠颅内肿瘤MMP9和Ki-67、NF-κB1、MMP9蛋白的表达;测量2组裸鼠皮下肿瘤的体积并绘制其生长曲线. 结果 (1)qRT-PCR显示miR-16在人脑胶质瘤中表达低于正常脑组织,且miR-16在Ⅰ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤中的表达量逐渐降低;NF-κB1在胶质瘤中的表达高于正常脑组织,且NF-κB1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的表达量逐渐增高,差异有统计学意义((P＜0.05).(2)与空白组和无义序列转染组比较,miR-16模拟物转染组细胞miR-16表达增加,NF-κB1基因表达下降,侵袭能力下降,NF-κB1和MMP-9蛋白的表达下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)荧光素酶实验显示pMIR-NF-κB1组的荧光标准化比值明显高于pMIR-NF-κB1 +pre-miR-16组,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)与U87阴性对照组比较,U87-miR-16组模型后第24～42天裸鼠皮下肿瘤的体积较小,差异有统计学意义(P＜0.05).与U87阴性对照组比较,U87-miR-16组裸鼠颅内肿瘤MMP-9的表达较低,NF-κB1、MMP-9和Ki-67的表达较低(Ki-67增殖指数分别为13.91％、32.98％). 结论 miR-16通过调控NF-κB1、MMP-9的表达从而抑制胶质瘤细胞侵袭和生长.

关键词：MicroRNA-16、核转录因子-κB1、基质金属蛋白酶9、神经胶质瘤、侵袭性

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分类号：R730.264(肿瘤学)

资助基金：江苏省领军人才项目;创新团队项目

在线出版日期：2015-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1081-1087