大鼠成年海马神经干细胞体外氧糖剥夺/复氧模型的建立

摘要：

目的 探讨一种简便、稳定、可重复的大鼠成年神经干细胞体外氧糖剥夺/复氧模型的制备方法 .方法 以来自于成年Fisher344大鼠的海马神经干细胞系为研究对象,以无血清培养基培养并传代,并用nestin和DAPI免疫荧光双染确认其生物学特性.将三气培养箱氧气浓度调至1％以制备缺氧环境,将培养基换为不含葡萄糖的Earle′s平衡盐溶液,分别缺氧缺糖2h、4h、6h、8h、10h后取出细胞,恢复正常条件继续培养24 h后倒置显微镜下观察细胞形态学变化,CCK-8比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率.同时设置常氧常糖的正常对照组.结果 与正常对照组相比,缺氧缺糖2h组细胞吸光度值明显升高,细胞存活率有一定的增长,但差异无统计学意义(P＞0.05).随着缺氧缺糖时间延长,神经干细胞形态学损伤逐渐加重,细胞吸光度值逐渐下降,缺氧缺糖6h后与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；缺氧缺糖6h起细胞存活率均较正常对照组明显下降,比较差异有统计学意义(P＜0.05)；神经干细胞凋亡率逐渐增高,且均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),其中缺氧缺糖6h时细胞的凋亡率已超过50％.结论 利用三气培养箱物理缺氧方法 可成功建立一种简便、有效的神经干细胞体外氧糖剥夺/复氧模型.

关键词：氧糖剥夺/复氧、神经干细胞、细胞凋亡、实验模型

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分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金30801184;广东省科技计划重点专项2011A030400007

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1238-1242