重组腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF的构建和鉴定

摘要：

目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标记的小鼠β-NGF重组腺病毒载体。 方法利用RT-PCR法从小鼠颌下腺总mRNA中扩增β-NGF全长cDNA片断，定向克隆于腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV(已标记绿色荧光蛋白)中；在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组，构建Adeasy- 1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF载体，并进行酶切鉴定。 结果成功获得小鼠-NGF全长扩增片段；pAdTrack-CMV-β-NGF测序验证含有目的基因；双酶切鉴定成功构建重组pAdTrack-CMV-β-NGF质粒；限制性内切酶的酶切分析结果证明成功构建同源重组的Adeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF载体。 结论本实验所用方法可高效、安全构建腺病毒载体pAdeasy- 1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF。

关键词：神经生长因子、腺病毒载体、绿色荧光蛋白、基因治疗

所属期刊栏目：10

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省科技计划项目2009B030803054

在线出版日期：2011-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：883-886