B7-H3促进胶质母细胞瘤增殖侵袭和迁移的实验研究

摘要：

目的:研究B7-H3对胶质母细胞瘤(GBM)增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法:采集GEPIA数据库中GBM、低级别胶质瘤(LGG)及正常脑组织中B7-H3的表达量数据，并分析差异及其与患者生存期的关系。通过转染短发夹RNA(shRNA)构建B7-H3低表达的GBM细胞株A172和TG-905(shRNA-B7-H3组)，并通过实时定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞学技术和蛋白质免疫印迹法(WB)分别检测B7-H3的表达量，验证敲低效率。对照组为未转染的野生型细胞(wt组)和转染对照shRNA的细胞(shRNA-ctl组)。通过羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色掺入法、CCK-8法、克隆形成实验分别检测B7-H3敲低后细胞增殖能力；通过划痕愈合实验及Transwell小室法检测B7-H3敲低后细胞迁移和侵袭能力；采用WB检测B7-H3敲低后下游信号分子的表达情况。结果:GEPIA数据库分析结果显示，B7-H3在LGG和GBM组织中表达均高于正常脑组织(均
P<0.01)，且低表达B7-H3的患者总生存期较高表达者长(
P<0.001)。A172细胞株中，qRT-PCR和流式细胞学技术检测结果显示，shRNA-B7-H3组的B7-H3表达量均低于shRNA-ctl组和wt组(均
P<0.01)；WB结果显示，shRNA-B7-H3组的B7-H3蛋白表达低于shRNA-ctl组和wt组；CFSE结果显示，shRNA-B7-H3组24、48、72 h的细胞增殖能力均较shRNA-ctl组降低(均
P<0.001)；CCK-8法检测和克隆形成实验结果均显示，shRNA-B7-H3组的细胞增殖能力低于shRNA-ctl组和wt组(均
P<0.05)。细胞划痕愈合实验结果显示，与shRNA-ctl组和wt组比较，shRNA-B7-H3组48、72 h的划痕愈合能力均降低(均
P<0.01)。Transwell小室结果显示，B7-H3敲低后，迁移和侵袭能力均下降(均
P<0.001)。WB结果显示，B7-H3敲低后细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)表达下调，而Bcl-2相关性蛋白(Bax)表达上调。上述实验在TG-905细胞中得到相似的结果。
结论:B7-H3通过上调CDK4、p-JAK2和下调Bax促进GBM的增殖、侵袭和迁移。

关键词：神经胶质瘤、基因敲除技术、肿瘤侵润、肿瘤转移、B7-H3

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资助基金：山东省重点研发计划2016GSF201056, 2018GSF118035;the Key Research Project Program of Shandong Province2016GSF201056, 2018GSF118035

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：401-408