应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型的实验研究

摘要：

目的 应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型.方法 采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞,应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤(形变率为13.4％、频率为5.0 Hz).并按照时间的长短分为对照组和6、12、24h组.应用数字全息显微镜(DHM)动态检测细胞平均面积和平均厚度值,采用锥虫蓝染色法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞存活率和LDH的释放情况,并通过流式细胞术检测细胞周期和Sub-G1期峰的变化.结果 (1)DHM检测结果显示:与对照组比较,损伤6h后HT-22细胞面积由(603.9±28.5) μm2降至(182.9 ±4.5)μm2(t=21.93,P＜0.01),细胞厚度由(4.0±0.2)μm升至(8.3 ±0.3) μm(t=16.65,P＜0.01).(2)细胞存活率结果显示:对照组细胞存活率为(95.0±1.6)％,而损伤后6 h[(59.7±4.5)％]较对照组显著下降(t=10.44,P＜0.01).损伤后12h和24 h的细胞存活率[分别为(77.0±2.9)％、(85.0±3.3)％]虽较6h组上升(分别为t=4.56,P＜0.05;t =6.45,P＜0.01),但仍低于对照组(分别为t=7.56,P＜0.01;t=3.873,P＜0.05).(3)LDH检测结果显示:细胞应力加载损伤后6h,LDH的释放水平[(273.9 ±4.6) ng/L]显著高于对照组[(51.7±5.8)ng/L,t=42.48,P＜0.01],而12 h组和24 h组LDH的释放水平[分别为(255.2±4.4)ng/L、(240.2 ±6.0) ng/L]均低于6h组(分别为t=4.14,P ＜0.05;t =6.28,P＜0.01).(4)流式细胞术检测结果显示:与对照组[(0.6±0.3)％]相比,损伤6 h组Sub-G1凋亡峰比例[(6.5±0.6)％]显著上升(t=14.90,P＜0.01),而细胞死亡比例随时间的延长而减少,尤以损伤24 h后[(2.1±0.5)％]的峰值较6h组降低最为显著(t=9.61,P＜0.01).结论 应用细胞应力加载系统成功建立HT-22体外细胞损伤模型,该模型重复性好,操作简便,为进一步研究颅脑创伤的病理生理机制提供了一种精确、有效、可控的模型制作方法.

关键词：颅脑损伤、模型、动物、应力加载系统、HT-22细胞、细胞损伤模型

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分类号：R96;TD2

资助基金：国家自然科学基金31200809;武警部队后勤科研项目WJHQ2012-20;武警后勤学院科研创新团队科学基金WHTD201306National Natural Science Foundation of China31200809;Logistics Fund of Chinese People's Armed Police ForcesWJHQ2012-20;Science Foundation of Innovation Team of Logistics University of Chinese People's Armed Police ForcesWHTD201306

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：398-402