siMDR1基因转染人类BT325胶质瘤细胞系的表达

摘要：

目的 探讨siMDR1基因转染人类胶质母细胞瘤细胞BT325后细胞的表达能力.方法 设计并合成siRNA质粒,取培养对数期生长良好的胶质母细胞系BT325,传代培养.将阳离子脂质体(Lipofectamine 2000)和质粒MDR1 DNA按比例共转染.瞬时对转染成功的细胞系应用抗性药物-嘌呤霉素进行筛选,筛出稳定的细胞系后,分别在荧光显微镜下分析转染情况.通过免疫细胞化学染色及图像分析对瞬时转染和稳定转染的BT325细胞进行检测,确定MDR1基因产物P-糖蛋白(P-gp)表达水平.阿霉素对瞬时转染及稳定转染的BT325耐药性进行分析.结果 成功构建了逆转录病毒si RNA质粒载体,经过瞬时转染BT325细胞生长状态良好,48h表达绿色荧光最强.加入嘌呤霉素筛选后,在第8天出现单细胞克隆.免疫细胞化学染色证实瞬时转染与稳定转染BT325细胞P-gp的表达下降.细胞的转染效率为70%～80%.BT325细胞经过RNA干扰,细胞对MDR1耐药性明显下降,IC50降低,细胞的耐药因子(RF)有所升高.结论 siMDR1基因瞬时转染和稳定转染都可以抑制P-gp蛋白的表达,其可以作为基因治疗的重要手段.

关键词：神经胶质瘤、RNA干扰、基因疗法

所属期刊栏目：23

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：北京市自然科学基金7063072

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：119-122