人EGFL7基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建人类表皮生长因子域7(EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 将靶向EGFL7基因的短发夹结构RNA(shRNA)表达序列连接到包含U6启动子及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,命名为pGCL-GFP-vshEGFL7,经多聚酶链反应(PCR)和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0通过lipofectamine 2000 共转染至包装细胞293T,包装产生病毒液,测定其滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实EGFL7shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为4.8×107TU/ml.结论 成功构建人EGFL7基因shRNA慢病毒载体.

关键词：类表皮生长因子域7、RNA干扰、短发央结构RNA、慢病毒

所属期刊栏目：8

分类号：R341.3(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30500558,30672149

在线出版日期：2010-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：513-516