PYGO2基因RNA干扰真核表达载体的构建

摘要：

目的 构建PYGO2基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以PYGO2为靶基因,以pSUPER.puro质粒为载体,设计构建重组体,根据基因库(GenBank)提供的PYGO2基因核苷酸序列,在http://www.ambion.com网站上使用siRNA Target Finder软件进行目的基凶的siRNA序列对应DNA的设计与筛选,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pSUPER.puro中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pSUPER.puro-PYGO2质粒转染胶质瘤C6细胞48 h,检测其对该细胞PYGO2蛋白的影响.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低胶质瘤细胞PYGO2的蛋白表达,重组载体构建成功.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制PYGO2表达的siRNA真核表达载体.

关键词：PYGO2、RNA干扰、真核表达载体、构建

所属期刊栏目：8

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2009-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：127-130