大鼠PnNOS基因修饰脂肪源性干细胞的构建

摘要：

目的 构建过表达大鼠阴茎神经源性一氧化氮合酶(PnNOS)基因大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs),为基因修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍(ED)大鼠模型提供种子细胞.方法 获取大鼠PnNOS基因,并与线性化的腺病毒真核表达载体pDC315-EGFP定向克隆连接.构建正确的pDC315-PnNOS-EGFP穿梭质粒转染293 T细胞,采用Western Blot检测PnNOS基因在293 T细胞中的表达情况.利用AdMax腺病毒包装系统包装产生重组腺病毒,包装后扩增纯化并测定病毒滴度.PnNOS基因重组腺病毒转染大鼠ADSCs,观察GFP表达情况和Western Blot检测PnNOS基因表达情况.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析、测序鉴定和目的质粒Western Blot表达检测鉴定,证实pDC315-PnNOS-EGFP重组腺病毒载体构建成功.重组腺病毒包装成功且病毒滴度为5.0×1 09 PFU/ml.Western Blot于大鼠ADSCs中检测到约161 KDa大小条带,其与PnNOS蛋白分子量大小基本相一致.结论 大鼠PnNOS基因修饰的ADSCs构建成功,从而为基因修饰ADSCs移植治疗ED提供了良好的基因工程细胞.

关键词：PnNOS基因、脂肪源性干细胞、重组腺病毒、勃起功能障碍、大鼠

所属期刊栏目：8

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金资助项目81070487和81370705;中国博士后科学基金资助项目2013M542191;广东省自然科学基金资助项目S2012010009140;广东省科技计划项目基金资助项目2010B031600038;广东省医学科研基金资助项目B2012114;广东省科技计划项目2011B0603000037;国家自然科学基金项目81370702

在线出版日期：2014-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：52-56