Fibulin-1蛋白的真核表达与ELISA检测方法的建立

摘要：

目的 建立检测血清中Fibulin-1蛋白浓度的ELISA方法.方法 构建Fibulin-1蛋白真核表达载体,以人Fibulin-1基因编码序列为模板,将目的片段定向克隆入载体并转入毕赤酵母菌,进行Fibulin-1蛋白的真核表达.表达产物纯化后,Western blotting检测证明纯化的重组蛋白的抗原特异性.以该蛋白为定标绘制标准曲线,建立人血清ELISA检测方法并检测其精密度和回收率,最后初步分析人血清中Fibulin-1的含量.结果 从真核表达体系获得了纯化的Fibulin-1蛋白,其具有良好的抗原特异性;建立的ELISA方法线性相关系数R2=0.98,线性范围为12.5～800 ng/mL,检测灵敏度为6.25 ng/mL,蛋白回收率在94.33％～109.33％之间,CV均＜10％,具有良好的重复性;检测30例正常人血清样本中Fibulin-1的含量约为(31 ±8) μg/mL.结论 建立的ELISA方法可用于检测血清中的Fibulin-1蛋白含量.

关键词：Fibulin-1蛋白、真核表达、酶联免疫吸附测定

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分类号：TS2;R31

资助基金：国家十二五科技重大专项课题2012ZX10002017-005,2012ZX10002016-023,2012ZX10002010-001-007;国家自然科学基金81000936,81172036;教育部博士点基金20100171120107,20100171120084,20120171110082;广东省自然科学基金S2012010008792;中山大学青年教师培育项目10ykpy05

在线出版日期：2014-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：56-59