泛素特异性肽酶22经Wnt/β-catenin通路调控结直肠癌化疗耐药的机制研究

摘要：

目的 探讨泛素特异性肽酶22(USP22)作用于Wnt/β-catenin信号通路参与结直肠癌的发生和化疗耐药的分子机制.方法 采用氟尿嘧啶(5-Fu)处理结直肠癌细胞株HT-29,建立耐药细胞株HT-29/5-Fu;构建USP22 siRNA稳定表达细胞株(表示为HT-29-sh USP22、HT-29/5-Fu-sh USP22).CCK-8法检测HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性、抑制USP22表达后结直肠癌细胞对5-Fu敏感性的影响;采用Western blotting检测不同质量浓度5-Fu诱导下HT-29细胞中USP22蛋白表达,HT-29和HT-29/5-Fu细胞中USP22和 β-catenin蛋白表达,以及抑制USP22表达对结直肠癌细胞USP22、β-catenin表达的影响.结果 (1)HT-29与HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的IC50值分别为(1.58±0.23)mg/L和(14.58±0.94)mg/L,其中HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性显著下降(n=6,t=8.476,P<0.01).(2)在0.5、5.0 mg/L的5-Fu诱导后,HT-29细胞内USP22蛋白表达水平(USP22/β-actin)显著升高(0.5 mg/L vs 0 mg/L:t=7.618,P<0.05;5.0 mg/L vs 0 mg/L:t=6.992,P<0.05).HT-29/5-Fu组中USP22蛋白表达水平为0.92±0.11,显著高于HT-29组的0.18±0.06(t=7.618,P<0.05).(3)HT-29-sh USP22组对5-Fu的IC50为(0.25±0.23)mg/L,显著低于HT-29组(t=6.662,P<0.01).HT-29/5-Fu-sh USP22组对5-Fu的IC50为(1.36±0.14)mg/L,显著低于HT-29/5-Fu组(t=7.002,P<0.01),但与HT-29组相比,差异无统计学意义(t=1.586,P>0.05),抑制USP22表达可增强结直肠癌细胞HT-29对5-Fu的敏感性.(4)HT-29-sh USP22组的USP22蛋白表达水平为0.07±0.01,与HT-29组相比下调(t=7.105,P<0.01).HT-29/5-Fu-sh USP22组的USP22蛋白表达水平为0.33±0.02,与HT-29/5-Fu组相比,USP22蛋白表达水平下调(t=6.153,P<0.01).HT-29-sh USP22、HT-29/5-Fu-sh USP22中 β-catenin蛋白表达水平与相应对照组HT-29、HT-29/5-Fu相比显著下调(HT-29-sh USP22 vs HT-29:t=8.823,P<0.01;HT-29/5-Fu-sh USP22 vs HT-29/5-Fu:t=7.656,P<0.01).结论 5-Fu可诱导结直肠癌细胞USP22表达增高.抑制USP22表达可增加结直肠癌细胞对5-Fu的药物敏感性,其机制可能是抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而有效逆转结直肠癌细胞对5-Fu的耐药.

关键词：结直肠肿瘤、泛素特异性肽酶22、Wnt/β-catenin信号通路、抗药性、肿瘤

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资助基金：衡水市重点研发项目2017014013C-32

在线出版日期：2019-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：109-113