淋病奈瑟菌NGO2105蛋白660 ~ 1 468肽段的表达纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的660 ~ 1 468肽段，制备并鉴定其多克隆抗体。方法:将pCold TF-NGO2105
660-1468 aa重组质粒转化至
E.coli BL21（DE3）菌中进行蛋白表达。包涵体蛋白经变性复性处理后纯化目的蛋白。目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清；采用ELISA法检测抗体效价，Western印迹分析抗体对淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白的特异性，流式细胞仪分析抗血清与淋病奈瑟菌的亲和力，黏附抑制实验评估抗NGO2105
660-1468 aa抗体对淋病奈瑟菌对人宫颈上皮细胞ME-180细胞黏附作用的抑制能力。不同处理组间比较采用
t检验。
结果:NGO2105
660-1468 aa蛋白以包涵体的形式呈现，通过变复性和纯化后得到了可溶性NGO2105
660-1468 aa蛋白，以该蛋白免疫小鼠后抗血清的效价为5.12 × 10
6，流式细胞仪分析结果显示，该抗体能较好与淋病奈瑟菌的NGO2105
660-1468 aa片段结合。黏附抑制实验结果提示，相比未处理组的黏附率（100%），抗NGO2105
660-1468 aa抗体在20和40倍稀释时均能显著抑制淋病奈瑟菌的黏附作用（黏附率= 52.9%、79.2%；
t = 8.40、5.29；
P < 0.001、= 0.006），呈现一定的浓度梯度依赖。
结论:成功表达及纯化出NGO2105
660-1468 aa肽段蛋白，制备出高效价的多克隆抗体，该抗体与淋病奈瑟菌有较好的亲和力且有黏附抑制能力。

关键词：淋病奈瑟球菌、NGO2105蛋白、多克隆抗体、抗体亲和力、细菌黏附、免疫接种、疫苗

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资助基金：国家自然科学基金81760358、82260330;National Natural Science Foundation of China81760358, 82260330

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：216-221