T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响

摘要：

目的 探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2(TRP-21180-188)抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响.方法 构建TIM-3重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2,分别转染重组质粒及空质粒pFUSE-mIgG2Aae 1-Fc2至人上皮293T细胞,继续培养48 h,制备含TIM-3、免疫球蛋白(Ig-tail)的上清液.TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素(IL)-2刺激培养5d,以未刺激细胞作为对照组.构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系,分为空白对照组(加293T细胞培养48 h上清液)、TIM-3组(加含TIM-3上清液)、阴性对照组(加含Ig-tail上清液).CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度,流式细胞仪检测共培养体系中CD8+T淋巴细胞.结果 酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中,检测到转染重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达,转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达.CCK-8法检测显示24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为(100.00±10.42)％、(108.70±9.90)％、(78.06±6.37)％,48 h时分别为(100.00±6.24)％、(168.00±2.98)％、(42.93±5.93)％;24 h、48 h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组(均P＜ 0.05).TIM-3组48 h相比24 h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).24 h时,空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为(216.44±7.85)、(223.67±7.79)、(192.96±5.05) ng/L,48 h时分别为(230.06±4.23)、(167.24±3.33)、(54.95±0.57) ng/L.24 h、48 h时,TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P＜ 0.05).24 h、48 h时,TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数分别为0.421％、2.22％、3.30％,48 h时分别为0.577％、0.691％、4.06％.24 h、48 h时TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组.结论 TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α,提高CD8+T淋巴细胞.

关键词：黑色素瘤、实验性、疫苗、亚单位、T淋巴细胞、细胞毒性、干扰素γ、T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3

所属期刊栏目：49

分类号：R772.2;R512.62;R392.11

在线出版日期：2016-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：82-87