miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

摘要：

目的 研究miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、细胞周期及凋亡的调控效应.方法 化学合成miR-145的模拟物,采用瞬时转染的方法过表达miR-145.采用实时PCR方法检测miR-145的表达.MTS方法检测过表达miR-145对HaCaT细胞增殖的影响.流式细胞仪分析过表达miR-145对细胞周期及凋亡的影响.采用荧光素酶实验,实时PCR和Western印迹鉴定NRAS是否为miR-145的靶基因.结果 与阴性对照(NC)mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组miR-145表达水平上调(85.00±1.21)倍,两组差异有统计学意义(t=115.90,P＜ 0.001).转染miR-145 mimics有抑制HaCaT细胞的增殖作用(F=8.76,P=0.008);转染后的时间因素(24、48、72、96 h)对细胞有影响(F=17.85,P＜ 0.001),转染mimics和培养时间之间不存在交互作用(F=1.21,P=0.18).与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组的早期凋亡、晚期凋亡细胞比例均明显增加,差异有统计学意义(18.9％±4.1％比4.3％±1.2％,t=7.126,P＜0.01;9.3％±2.3％比3.6％±1.6％,f=12.38,P＜ 0.01).与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组HaCaT细胞的G2及S期细胞比例均明显降低,差异均有统计学意义(6.26％±1.2％比19.36％±3.45％,t=7.610,P=0.017;7.91％±1.3％比18.56％±5.23％,t=7.230,P=0.019),而处于G1期的细胞比例升高,差异也有统计学意义(85.83％±5.2％比62.08％±6.23％,t=11.78,P=0.007).与NC mimics联合psi-CHECK2-NRAS-wild组相比,在293T细胞中共转染miR-145mimics和psi-CHECK2-NRAS-wild质粒,其荧光素酶值明显下降,miR-145可抑制含NRAS mRNA 3'UTR报告基因的荧光素酶表达(t=11.09,P=0.008);而将NRAS mRNA 3'UTR报告基因上miR-145的结合位点进行突变后,转染miR-145 mimics对含NRAS mRNA 3'UTR报告基因的荧光素酶表达无明显的影响(P＞0.05).实时PCR和Western印迹结果表明,过表达miR-145 mimics后,NRAS mRNA表达水平未出现明显变化(P＞0.05),对NRAS蛋白水平的表达有明显的抑制(1.52±0.07比0.20±0.02,t=28.43,P＜0.01).结论 miR-145可能通过NRAS影响HaCaT细胞的周期从而抑制细胞的增殖,同时促进HaCaT细胞的凋亡

关键词：角蛋白细胞、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、尖锐湿疣、HaCaT细胞、miR-145、NRAS

所属期刊栏目：48

分类号：R735.3;R365;R97.2

资助基金：广东省医学科研基金B2013339

在线出版日期：2015-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：416-420