用RNA干扰沉默P2X7受体抑制小胶质细胞释放炎性介质的探讨

摘要：

目的 观察RNA干扰(RNAi)沉默小胶质细胞内的P2X7受体(P2X7R)对小胶质细胞释放炎性介质白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响. 方法 构建靶向P2X7R基因的小干扰RNA(siRNA).以脂质体为转染剂将siRNA转染到经β淀粉样蛋白(Aβ1-42)激活的原代培养的小胶质细胞内.根据刺激物不同分为Aβ1-42、Aβ1-42/siNC、Aβ1-42/siP2X7R 及空白对照组.处理48 h后,收集各组小胶质细胞,用CCK-8检测细胞存活率,用Real-Time PCR和Western blot检测P2X7R的mRNA和蛋白表达水平,用免疫细胞化学染色观察细胞形态及P2X7R免疫反应强度;收集各组细胞上清液测定IL-1β、TNF-α和NO浓度. 结果 Aβ1-42和siRNA对小胶质细胞存活率没有影响,与空白对照组比较差异无统计学意义.RNA干扰后Aβ1-42/siP2X7R组P2X7R的mRNA和蛋白表达均显著下降,免疫细胞化学染色该组小胶质细胞活性和P2X7R免疫反应强度均降低.沉默P2X7R后,Aβ1-42、Aβ1-42/siNC、Aβ1-42/siP2X7R及空白对照组细胞上清液IL-1β浓度分别为(52.54±3.21)μg/L、(54.94±2.54) μg/L、(28.70±3.58)μg/L和(24.55±4.34) μg/L;TNF-α浓度分别为(64.40±4.80)μg/L、(60.94±1.63)μg/L、(25.69±3.13)μg/L和(19.21±1.97)μg/L.Aβ1-42/siP2X7R组细胞上清液IL-1β及TNF-α浓度均低于Aβ1-42和Aβ1-42/siNC组(P＜0.05),与空白对照组比较差异无统计学意义.Aβ1-42/siP2X7R组细胞上清液NO浓度为(1.33±0.19)μmol/L,低于Aβ1-42组(4.49±0.28) μmol/L和Aβ1-42/siNC组(4.78±0.33) μmol/L,与空白对照组(1.07±0.36) μmol/L比较差异无统计学意义. 结论 RNA干扰可有效沉默小胶质细胞内的P2X7R,抑制小胶质细胞释放炎性介质IL-1β、TNF-α和NO.P2X7R有望成为RNA干扰治疗阿尔茨海默病的一个新靶点.

关键词：阿尔茨海默病、小神经胶质细胞、RNA、小分子干扰

所属期刊栏目：33

分类号：R711.31;G804.7;R329.2

资助基金：国家自然科学基金81071201

在线出版日期：2014-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：648-652