RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放

摘要：

目的 探讨利用RNA干扰方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体(WPB)释放的效果和意义,为防治心血管病和开发小分子RNA药物奠定基础.方法 设计腺病毒介导的针对调节WPB释放的关键蛋白N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子(NSF)N端功能区的小发卡RNA(shRNA),筛选鉴定收获病毒,使用NSF-shRNA转染人主动脉内皮细胞为实验组、阴性对照病毒感染为阴性组、不加任何干扰为空白组,RT-PCR和Western blot法观察对NSFmRNA及蛋白表达的抑制作用,免疫荧光染色观察对WPB释放的影响.结果 用携带NSF shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,实验组NSF mRNA表达与空白组(P=0.02)及阴性组(P=0.035)比较,差异有统计学意义；实验组NSF mRNA表达随时间延长持续下降,24、48及72 h明显下降,差异有统计学意义(P=0.048).实验组NSF蛋白表达,与空白组(P=0.031)及阴性组(P=0.004)比较,差异有统计学意义；而空白组与阴性组差异无统计学意义(P=0.249).免疫荧光染色显示,NSF-shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的WPB释放.结论 携带NSF-shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制NSF mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的WPB释放,对未来动脉粥样硬化及急性冠状动脉综合征的防治有一定的参考价值.

关键词：RNA干扰、内皮细胞、Weibel-Palade小体、N-乙基顺丁烯二酰亚胺-敏感蛋白质类、逆转录聚合酶链反应、RNA、信使

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分类号：R2 ;R54

资助基金：北京市自然科学基金7083108

在线出版日期：2012-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：630-634