MEPE基因沉默对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究

摘要：

目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein,MEPE)基因沉默对人牙髓细胞(Human Dental Pulp Cells,hDPCs)增殖和成牙本质分化能力的影响,探讨其在牙髓损伤修复中的功能.方法:酶消化组织块法分离培养hDPCs,以lipo2000介导siRNA-hMEPE转染hDPCs,以阴性对照组和未转染组设为对照,l、3、5、7d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染hDPCs后以矿化诱导液培养5、7、10d后,实时荧光定量RT-PCR检测骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin Sialophos-phoprotein,DSPP)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、Collagen I mRNA表达水平.结果:CCK-8结果显示Si-h-MEPE转染hDPCsld后OD值下降,3d时到达最低值,且均低于未转染组与阴性对照组,3d时差异有统计学差异(P＜0.05),未转染组与阴性对照组中,OD值持续升高,7d时到达峰值,与各自组内其他时间点比较有统计学差异(P＜0.05);ALP活性检测结果显示,Si-h-MEPE转染hDPCs3d细胞OD值最低,且明显低于未转染组与阴性对照组(P＜0.05),未转染组与阴性对照组hDPCsOD值呈现逐渐升高趋势,在7d时达到最大值(P＜0.05).Si-h-MEPE转染hDPCs3d时BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA的表达量均较未转染组与阴性对照组下调(P＜0.05).在未转染组中,BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA水平持续升高,在7d时达最高值,与3d比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MEPE基因瞬时沉默抑制hDPCs增殖、使BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ基因表达下调,ALP活性降低,与未转染组与阴性对照组比较结果提示MEPE可能通过调控hDPCs的增殖和成牙本质分化能力,在牙髓损伤修复中发挥重要作用.

关键词：人牙髓细胞、成牙本质分化、重组人细胞外基质磷酸化糖蛋白

所属期刊栏目：11

分类号：R781(口腔科学)

在线出版日期：2014-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：209-215