人工合成小干扰RNA抑制涎腺腺样囊性癌DNA甲基转移酶1的表达

摘要：

目的 通过筛选针对涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT-1)基因有效的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列和分析RNA干扰(RNA interference,RNAi)作用的时效、量效关系,为建立ACC稳定抑制DNMT-1的表达载体,深入了解DNMT在ACC抑癌基因甲基化过程中的作用.方法 设计并人工合成4对siRNA,脂质体介导分别转染ACC细胞系ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞,分别于转染后24、48和72 h,采用PCR、RT-PCR和Western blot方法检测各细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达,筛选有效的siRNA干扰序列,同时设置siRNA不同浓度转染组,分析RNAi作用的量效关系.以Cy3标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶siRNA作为阳性对照组.结果 2对siRNA对3株ACC细胞系细胞DNMT-1的mRNA表达产生了抑制作用,它们分别使ACC-2、ACC-3、ACC-M DNMT-1表达抑制67%、86%、92%和76%、76%、86%,抑制作用出现的时间为转染后24～48 h,维持24～48 h,与siRNA浓度成正比,Western blot检测符合mRNA的检测结果.结论 得到了2对针对ACC DNMT-1基因有效的siRNA干扰序列.它们能显著抑制涎腺ACC细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达,该抑制作用具有时间依赖性和浓度相关性.

关键词：癌、腺样囊性、甲基转移酶、基因、肿瘤抑制

所属期刊栏目：42

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30572054;上海市科委资助项目044119619;04JC14091

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：225-228