咪喹莫特治疗支气管哮喘作用机制的实验研究

摘要：

目的 研究新型免疫调节剂咪喹莫特对支气管哮喘(简称哮喘)的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法 (1)40只BALB/c小鼠(每组10只)和48只SD大鼠(每组12只)分为对照组、哮喘组、咪喹莫特组和地塞米松组,建立大鼠和小鼠哮喘模型.用卵清白蛋白激发前吸入0.15%咪喹莫特混悬液5 ml.末次激发后24 h观察肺组织炎症及测定气道反应性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、嗜酸粒细胞活化趋化因子(eotaxin)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、T-bet、GATA-3、信息转导转录激活子6(STAT6)mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中eotaxin、MDC、TARC及支气管肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ浓度;用Western blot法测定肺组织中T-bet、GATA-3、STAT6蛋白水平;(2)分离和培养致敏大鼠气管旁淋巴结细胞(PBLN),分为空白对照组、阳性对照组、地塞米松组和药物1～3组,测定不同时间点各组细胞上清液中IL-4、IFN-γ蛋白和细胞的mRNA表达;(3)分离和培养致敏小鼠的脾脏T淋巴细胞,用流式细胞仪测定经咪喹莫特刺激后不同时间点细胞内IL-4、IFN-γ水平;(4)培养致敏大鼠CD+4T淋巴细胞,测定经咪喹莫特干预后T-bet、GATA-3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/ml)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3710.83±197.49)cm H20·ml-1·s-1(1 cm H20=0.098 kPa),咪喹莫特组分别为(1.34±0.16)、(3.47±0.49)、(9.29±1.27)、(25.22±5.44)cm H2O·ml-1·s-1,两组相同剂量比较差异有统计学意义(D值分别为88.98、56.00、45.00、108.00,P均＜0.01);哮喘组大鼠气道壁和肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)分别为(26.0±1.6)、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,咪喹莫特组分别为(12.4±2.9)、(24.2±3.7)个/mm2、9.2±0.6、4.0±0.5,两组比较差异有统计学意义(D和q值分别为193.00、16.92、185.50、7.66,P均＜0.01);哮喘组肺组织中T-bet mRNA和蛋白表达量分别为0.08±0.12、0.18±0.06,咪喹莫特组分别为0.48±0.08、0.48±0.17,两组比较差异有统计学意义(D值分别为120.96、177.98,P均＜0.01);哮喘组肺组织中GATA-3 mRNA和蛋白表达量分别为1.56±0.28、2.25±0.74,咪喹莫特组分别为0.54±0.14、0.50±0.14,两组比较差异有统计学意义(D值分别为166.96、310.97,P均＜0.01);空白对照组24、48 h时PBLN细胞培养液中IL-4、IFN-γ分别为(0±0、0±0、22±5、31±5) pg/ml.随着培养时间的延长,药物2组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(23±5)、(39±11)、(149±31)、(154±28) pg/ml,药物3组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(25±6)、(40±12)、(166±30)、(158±31) pg/ml,与阳性对照组[(43±13)、(56±12)、(100±22)、(112±33) pg/ml)]比较差异有统计学意义(药物2、3组24、48 h时IL-4的D值分别为9.90、8.79、8.80、8.10;药物2、3组24、48 h时IFN-γ的q值分别为4.80、6.40、3.95、4.31,P均＜0.05);哮喘组小鼠BALF中细胞总数及EOS分别为(8.7±1.4)×106 /L、(29.80±7.00)%,咪喹莫特组为(4.1±1.3)×106 /L、(8.90±2.40)%,两组比较差异有统计学意义(q值分别为16.40、7.40,P均＜0.05);哮喘组小鼠血清eotaxin、MDC和TARC水平分别为(593±41)、(170±20)、(221±25) pg/ml,咪喹莫特组分别为(501±76)、(84±13)、(163±35) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.70、9.80、4.50,P均＜0.05);(4)咪喹莫特组小鼠肺组织eotaxin、MDC、TARC mRNA表达分别为0.65±0.17、0.66±0.12、0.66±0.34,哮喘组分别为0.85±0.11、0.96±0.10、0.94±0.28,对照组分别为0.45±0.08、0.39±0.09、0.24±0.08,哮喘组与咪喹莫特组比较差异有统计学意义(q值分别为1.50、8.10、2.40,P均＜0.05);哮喘组与对照组比较差异有统计学意义(q值分别为3.00、15.40、5.90,P均＜0.05).结论 咪喹莫特可能通过提高转录因子T-bet mRNA\蛋白的表达和抑制转录因子GATA-3和STAT6 mRNA和蛋白表达,使失衡的Th1/Th2细胞得以纠正,从而抑制哮喘气道炎症.

关键词：哮喘、咪喹莫特

所属期刊栏目：30

分类号：R9(药学)

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：509-517