细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73对肝纤维化的治疗作用及相关机制研究

摘要：

目的:探讨Rab11抑制剂细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73(CDKI-73)在肝纤维化中的治疗作用及潜在分子机制。方法:将人LX2细胞分成4组：阴性对照组、转化生长因子-β(TGF-β)组、CDKI-73组和TGF-β+CDKI-73组。取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.04±0.62)g，分成3组，每组5只：对照组(腹腔注射橄榄油+CDKI-73空载体灌胃)、四氯化碳(CCl
4)组(腹腔注射CCl
4+CDKI-73空载体灌胃)和CCl
4+CDKI-73组(腹腔注射CCl
4+CDKI-73灌胃)。另取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.06±0.34)g，分成3组，每组5只：假手术(Sham)组、胆管结扎组(打开腹腔寻找到胆总管并结扎+ CDKI-73空载体灌胃)和胆管结扎+CDKI-73组(打开腹腔寻找到胆总管结扎+CDKI-73灌胃)。蛋白质印迹法检测CDKI-73对LX2细胞以及小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或纤维粘连蛋白(FN)的表达差异；Masson及天狼星红检测CDKI-73处理组及对照组小鼠肝纤维化的不同程度；免疫组化检测不同处理组小鼠肝脏α-SMA的表达差异。
结果:CCl
4组小鼠天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于对照组均增加(
q＝38.47、24.99、36.79)，而CCl
4+CDKI-73组天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于CCl
4组的各指标均下降(
q＝24.72、14.87、27.50)，差异均具有统计学意义(均
P<0.001)。胆管结扎组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于Sham组均增加(
q＝28.23、41.01、44.16)，而胆管结扎+CDKI-73组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于胆管结扎组的各指标均下降(
q＝22.88、34.31和33.97)，差异有统计学意义(均
P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN蛋白相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组(α-SMA：3.71±0.34比1.28±0.31；FN：3.21±0.39比0.83±0.06)，差异具有统计学意义(均
P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN mRNA相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组的各对应值，差异均具有统计学意义(均
P<0.001)。CDKI-73组TGF-β受体Ⅱ蛋白相对表达量高于阴性对照组(4.68±0.63比1.00±0.22)，差异有统计学意义(
P＝0.004)。TGF-β+CDKI-73组磷酸化SMAD2的相对表达量低于TGF-β组(1.67±0.24比3.99±0.44)，差异有统计学意义(
P<0.001)。Transwell实验结果表明，0.5 μmol/L CDKI-73即可抑制LX2细胞的迁移能力，且随着CDKI-73浓度的增加，抑制能力也越强。
结论:CDKI-73在体内和体外均可通过抑制依赖Rab11的TGF-β信号通路，从而抑制肝星状细胞的活化以及肝纤维化的形成。

关键词：肝纤维化、周期素依赖激酶抑制蛋白质类、肝星状细胞、TGF-β信号通路

所属期刊栏目：29

资助基金：国家自然科学基金82202903;National Natural Science Foundation of China82202903

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：278-284