微小RNA-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤影响的研究

摘要：

目的:探讨微小RNA(miR)-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响，并分析可能的机制。方法:雄性C57BL/6小鼠80只，鼠龄7～8周，体重23～25 g，无特殊病原体，采用随机数字表法分为8组，再灌注2 h组、6 h组、12 h组、24 h组以及假手术组，miR-330-3p agomir组(术前注射miR-330-3p激动剂)、miR-330-3p antagomir组(术前注射miR-330-3p抑制剂)和阴性对照组(术前注射miRNA阴性对照)，每组10只。除假手术组外均制备肝脏IRI模型，聚合酶链反应、Western印迹、免疫组化检测miR-330-3p、磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleave caspase-1)及gasdermin D(GSDMD)等的表达。双荧光素酶报告验证miR-330-3p的靶基因。采用miR-330-3p模拟物或抑制序列、miRNA阴性对照、PGAM5干扰RNA(siRNA)和干扰序列的阴性对照转染AML12细胞，然后检测PGAM5、Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、cleave caspase-1、GSDMD的表达。结果:小鼠肝脏缺血再灌注过程中，miR-330-3p相对表达量降低，而PGAM5相对表达量增高。miR-330-3p agomir组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)均低于阴性对照组，而miR-330-3p antagomir组ALT、AST高于阴性对照组，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。与阴性对照组比较，miR-330-3p agomir组小鼠肝组织中cleave caspase-1表达降低，而miR-330-3p antagomir组表达增加。双荧光素酶报告证实PGAM5是miR-330-3p靶基因。AML12细胞转染PGAM5 siRNA后PGAM5、NLRP3、cleave caspase-1、GSDMD蛋白相对表达为(0.24±0.09)、(0.12±0.07)、(0.15±0.07)、(1.08±0.08)，均低于干扰序列阴性对照组(1.17±0.14)、(0.36±0.09)、(0.68±0.09)、(1.36±0.08)，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。
结论:miR-330-3p可减轻小鼠肝脏IRI，其机制可能与miR-330-3p靶向抑制PGAM5介导的细胞焦亡有关。

关键词：微RNAs、再灌注损伤、磷酸甘油酸变位酶5、肝脏

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资助基金：国家自然科学基金81970562，81700556;National Natural Science Foundation of China81970562, 81700556

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：371-376