甘草甜素体外诱导肝癌细胞MHCC97-H自噬性死亡的实验

摘要：

目的 观察甘草甜素在体外对肝癌细胞MHCC97-H的抑制作用,探索其相关机制.方法 体外培养肝癌细胞MHCC97-H,加入不同浓度的甘草甜素,观察不同时间点细胞存活率的变化,摸索50％细胞存活的处理浓度和时间.建立细胞平板克隆和侵袭迁移实验模型,观察甘草甜素处理对MHCC97-H细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.对培养细胞进行吖啶橙染色,观察自噬小体的形成情况,并利用自噬抑制剂3-MA和自噬关键基因Atg7-siRNA抑制细胞自噬活性,检测细胞存活率.利用蛋白印迹(Western-blot)检测自噬相关蛋白LC3B的变化以及信号通路mTOR和ERK1/2的活化情况.结果 甘草甜素对MHCC97-H细胞活性具有显著抑制作用.2 mmol/L浓度的甘草甜素处理细胞48 h,细胞存活率约为50％.甘草甜素处理组细胞克隆球数量明显少于未处理组(176.7±14.5比410.0±32.1),细胞侵袭迁移率较低(41.0％±3.8％比100％).甘草甜素处理细胞胞质中自噬小体形成明显增加,LC3B-Ⅱ表达增强,LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值增大,P62降解加快.同时,可检测到p-mTOR表达减少和p-ERK1/2表达增加.自噬抑制后,细胞存活率高于对照组(3-MA:64.3％比45.9％;Atg7-siRNA:67.7％比47.1％).结论 甘草甜素具有增强肝癌细胞自噬活性,诱导细胞自噬性死亡的能力,具备极大的临床应用潜力.

关键词：肝癌、甘草甜素、自噬、MHCC97-H、信号通路、mTOR、ERK1/2

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资助基金：National Natural Science Foundation of China81370556,81672753;Science and Technology Research and Development Program of Shaanxi Province2012K13-02-02国家自然科学基金81370556、81672753;陕西省科技计划社会发展攻关项目2012K13-02-02

在线出版日期：2018-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：116-121