微RNA-758/星形细胞上调基因1信号通路调控肝癌细胞转移的分子机制

摘要：

目的 探讨微RNA(miR)-758对肝癌细胞转移的影响及其作用机制,研究miR-758对促癌基因星形细胞上调基因1(AEG-1)的调控作用.方法 用miR-758瞬时转染HepG2细胞,通过Transwell迁移和侵袭实验,观察miR-758对肿瘤细胞转移的影响.利用CCK8法检测细胞增殖活性,观察miR-758对肿瘤细胞增殖的影响.使用流式细胞仪定量分析细胞周期,观察miR-758对细胞周期的影响.通过上皮间充质转化(EMT)实验,观察miR-758是否影响肝癌细胞EMT.用miR-758瞬时转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察miR-758对管腔形成的影响.软件预测显示miR-758的靶基因为AEG-1.将含miR-758结合位点的AEG-1 3'UTR构建到荧光素酶表达载体中,用miR-758和AEG-1基因3'UTR载体共同转染HepG2细胞,验证miR-758的靶基因是否为AEG-1.用miR-758瞬时转染HepG2细胞,检测AEG-1蛋白的表达量变化.结果 miR-758过表达可抑制HepG2细胞的迁移、侵袭,抑制细胞增殖和周期,抑制HepG2细胞EMT,抑制HUVEC细胞管腔形成.miR-758和AEG-1基因3'UTR质粒共同转染HepG2细胞后,荧光素酶的表达量降低.miR-758靶点AEG-13'UTR突变后,荧光素酶的表达量恢复.另外,细胞中miR-758含量升高时,Western Blot检测到AEG-1蛋白水平的表达量降低.结论 miR-758负调控癌症转移的多个步骤,包括细胞迁移、侵袭、增殖、EMT以及血管新生等.miR-758下游靶基因为AEG-1.

关键词：微RNA、miR-758、星形细胞上调基因-1、肝癌、肿瘤转移

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分类号：R73;R58

资助基金：北京市自然科学基金7174314;国家自然科学基金面上项目81472328;国家科技支撑计划2015BAI02B00;首都临床特色应用研究与成果推广Z171100001017063;Beijing Natural Science Foundation7174314;National Natural Science Foundation of China81472328;National Science and Technology Support Program2015BAI02B00;Capital Clinical CharacteristicsZ171100001017063

在线出版日期：2017-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：689-693