shRNA干扰KAP-1基因表达对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新的影响

摘要：

目的 研究KAP-1对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新能力的影响.方法 采用免疫组织化学方法检测14例胰腺癌组织标本和配对癌旁组织标本KAP-1蛋白的表达情况.PCR扩增KAP-1 shRNA干扰序列,克隆至pGC-LV慢病毒表达载体；双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测.构建成功后感染人胰腺癌细胞株Panc-1细胞48 h后,通过Western blot实验和RT-qPCR实验检测KAP-1的表达量以及该细胞系相关EMT标志蛋白波形蛋白的表达.采用悬浮法培养人胰腺癌Panc-1细胞生成肿瘤干细胞球,通过测定初代以及次代肿瘤干细胞球的成球直径和数量判断KAP-1基因敲减对肿瘤干细胞球成球能力及自我更新能力的影响.结果 在14例胰腺癌组织标本和癌旁组织标本的免疫组织化学检测中,胰腺癌组织标本KAP-1阳性数为13例(P=0.002).构建的慢病毒载体感染细胞48 h后,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光.RT-qPCR实验显示感染KAP-1 RNA干扰慢病毒载体的Panc-1细胞KAP-1及EMT标志蛋白波形蛋白的表达量较未感染病毒细胞以及感染空载体细胞显著增高.KAP-1基因敲低表达的人胰腺癌Panc-1肿瘤干细胞球的初代以及次代的成球直径相较于转染空载体的Panc-1肿瘤干细胞球发生明显减小,在成球数量上也明显减少.结论 KAP-1在胰腺癌组织中存在表达,且与正常组织表达量具有明显差异.构建了高效稳定表达KAP-1的RNA干扰慢病毒转染系统.KAP-1转录因子表达量降低可以减弱人类胰腺癌细胞Panc-1细胞系生成干细胞球的自我更新能力.其机制可能与敲低KAP-1表达影响波形蛋白下调有关.

关键词：胰腺肿瘤、干细胞、基因表达

所属期刊栏目：19

分类号：R735.9;R329.28;Q786

资助基金：国家自然科学基金;贵州省肝胰疾病研究科技创新人才团队项目

在线出版日期：2013-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：520-525