ARHI 基因过表达对肝细胞癌血管生成的影响

摘要：

目的 探讨ARHI蛋白对肝细胞癌血管生成的影响及其机制.方法 以人肝组织总RNA为模板通过RT-PCR获取全长ARHIcDNA.将该序列克隆并构建pcDNA3.1-ARHI表达质粒.将pcDNA3.1-ARHI表达质粒转染人肝细胞癌细胞系Hep3B细胞,通过G418筛选稳定表达ARHI的细胞.应用MTT法检测过表达ARHI对细胞增殖活性的影响.分别用稳转空载体和ARHI的Hep3B细胞接种建立裸鼠人肝细胞癌移植瘤模型.每周测量瘤体积.5周后麻醉处死裸鼠.免疫组化法检测增殖细胞核标志物Ki 67和血管内皮细胞标志物CD31的表达.应用Western blotting法检测血管生成相关的mTOR通路中mTOR下游靶蛋白S6K1和4E-BP1的磷酸化情况,并检测肿瘤组织血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 ARHI过表达显著降低Hep3B细胞的增殖能力(P＜0.01).并且,该基因对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,ARHI组瘤体显著减小,抑瘤率达76.4％ (P＜0.01).免疫组化检测显示,ARHI显著抑制细胞增殖核抗原蛋白Ki-67 (P＜0.01)和血管内皮细胞标记物CD31(P＜0.05)的表达.Western blot法检测显示,ARHI显著抑制S6K1 (P＜0.01)和4E-BP1 (P＜0.05)的磷酸化,而且抑制肿瘤组织中HIF-1α (P＜0.05)和VEGF蛋白(P＜0.01)的表达.结论 过表达ARHI抑制肝细胞癌生长和血管生成,这可能与其抑制mTOR/VEGF通路有关,提示过表达ARHI可能成为肝细胞癌治疗的新方法.

关键词：ARHI基因、肝细胞癌、血管生成

所属期刊栏目：18

分类号：R256.4(中医内科)

资助基金：浙江省温州市2011年第二期科技计划项目Y20110106

在线出版日期：2012-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：709-713