小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体,进一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制.方法 (1)两步PCR法合成针对小鼠SCP2基因shRNA,并连接到质粒PDC312上；(2)采用AdMax TM Adenoviru5 Vector系统包装病毒,CsCl法纯化病毒、TCID50法测定滴度；(3)Western印迹检测SCP2蛋白验证重组腺病毒沉默效果,RT-PCR检测重组腺病毒在小鼠hepa-1～6细胞中SCP2、HMGCR、CYP7A1基因mRNA的表达.结果 (1)腺病毒载体Adsh1RNA和Adsh2RNA对SCP2均有抑制作用,在SCP2mRNA水平,与AdsshRNA组比较,Adsh1RNA tD1=9.056,P＜0.05,Adsh2RNA tD2=7.777,P＜0.05,差异均有统计学意义,蛋白水平与mRNA一致；(2)SCP2基因低表达时,CYP7A1 mRNA表达升高,t=10.68,P＜0.05,HMGCR mRNA表达下降,t=10.10,P＜0.05,差异有统计学意义.结论 成功构建小鼠SCP2基因的shRNA重组腺病毒载体.SCP2低表达时可能影响HMGCoA还原酶和CYP7-α1羟化酶的活性,导致胆固醇代谢的变化,从而减少胆固醇结石的形成.

关键词：腺病毒科、胆结石、基因

所属期刊栏目：18

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：145-149