构建含有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因腺病毒并体外检测

摘要：

目的 构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法 提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的 蛋白情况并检测目的 蛋白表达量.结果 成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的 蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的 蛋白表达趋于无明显差异性.结论 构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内,分泌表达目的 蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础.

关键词：CD40、PDC316质粒、融合基因、质粒构建、重组腺病毒

所属期刊栏目：16

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金X204003

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：208-211