微小RNA-155通过抑制Ets-1促进Th17分化

摘要：

目的 探讨微小RNA(miR)-155促进Th17分化的作用途径.方法 采用鼠CD4+T细胞磁珠分离试剂盒分离小鼠脾CD4+T细胞,加促Th17分化的IL-2、IL-23和IL-6刺激培养后,转染miR-155过表达或抑制慢病毒载体,流式检测CD4+T细胞IL-17的表达;ELISA检测细胞培养液IL-17分泌水平;荧光定量PCR检测miR-155、IL-17A和Ets-1 mRNA的表达.筛选Ets-1的siRNA干扰序列,检测si-Ets与miR-155共同作用对Th17分化的影响.采用单因素方差分析,两两比较采用Dunnett法,组间比较采用t检验.结果 对照未刺激组几乎不表达和分泌IL-17,对照刺激组表达IL-17的细胞和分泌IL-17增多.4组表达IL-17细胞百分比差异有统计学意义(F=160.549,P＜0.01),两两比较miR-155过表达组表达IL-17细胞百分比[(39.86±4.62)％]明显高于对照刺激组[(22.02±2.81)％,P＜0.01]和miR-155抑制组[(19.44±1.49)％,P＜0.01];miR-155过表达组上清液中IL-17水平[(1 509±136) pg/ml]也显著高于其他2个组[(923±42) pg/ml,P＜0.01;(767±94) pg/ml] (P＜0.01).4组上清液中IL-17表达差异有统计学意义(F=260.813,P＜0.01);两两比较与其他3组相比,miR-155过表达组miR-155高表达(12.53±0.80,1.78±0.14,7.16±0.62,6.47±0.92,P＜0.01)、IL-17A mRNA高表达(46.55±6.71,1.01±0.19,15.62±1.26,14.20±2.73,P＜0.01),Ets-1 mRNA低表达(0.66±0.10,1.19±0.04,1.01±0.16,1.37±0.27,P＜0.01).设计了3条针对Ets-1基因的siRNA,其中si-Ets-2抑制效果最好.si-Ets-2或si-Con与miR-155过表达或抑制慢病毒载体进行共转染,si-Ets-2组均比si-Con组IL-17A mRNA表达上调(17.19±3.58和10.08±0.76,t=-3.361,P=0.028),而Ets-1 mRNA表达下调(0.27±0.01和0.74±0.03,t=-30.275,P＜0.01),蛋白印迹法检测也可以看出si-Ets-2#组的Ets-1蛋白表达下降,在miR-155过表达组下降更为明显.结论 miR-155可以通过抑制Ets-1的表达而促进CD4+T细胞向Th17细胞分化.

关键词：CD4阳性T淋巴细胞、白细胞介素17、miR-155、Ets-1

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分类号：R735.7;S858.28;R392.12

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广东省自然科学基金;广东省医学科研基金;深圳市科技计划;深圳市福田区科技计划;深圳市医学重点学科建设项目

在线出版日期：2015-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：730-734