小鼠组氨酰tRNA合成酶与麦芽糖结合蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达与鉴定

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达小鼠组氨酰tRNA合成酶(HARS)与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合基因,通过亲和层析纯化以获得具有抗原特异性的重组蛋白.方法 提取C57BL/6小鼠肌肉组织总RNA,反转录为cDNA,利用软件设计一对特异性引物,扩增HARS基因上游591对碱基序列.对扩增产物和载体质粒pMALc-5e分别进行双酶切,再用T4连接酶连接得到重组质粒.将其转化大肠杆菌感受态细胞,挑取单克隆培养并鉴定质粒序列.异丙基-β-D硫化吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达后亲和层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白进行相对分子质量粗鉴定,蛋白印迹法鉴定抗原特异性.结果 重组HARS-MBP融合蛋白基因在大肠杆菌胞质中高效表达,亲和层析纯化后的融合蛋白与预测相对分子质量66 000相符,与抗体具有良好的特异结合能力.结论 小鼠HARS-MBP融合基因能够在大肠杆菌中稳定高效地表达,表达的蛋白具有良好的抗原特异性,为后续炎性肌病的研究提供了基础.

关键词：组氨酸tRNA连接酶、重组融合蛋白质类、HARS-MBP融合蛋白、原核表达

所属期刊栏目：17

分类号：R3;Q782;S435.32

资助基金：国家自然科学基金81072457

在线出版日期：2013-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：182-185,封3