人可溶型破骨细胞分化因子的克隆原核表达及活性分析

摘要：

目的 克隆人可溶型破骨细胞分化因子(sODF)基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法得到人可溶型破骨细胞分化因子(ODF)编码区cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-3,转化大肠杆菌感受态细胞JM109,0.1 mmo/L β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE).纯化蛋白,体外诱导破骨细胞分化.结果 获得人sODF基因cDNA,构建原核表达载体pGEX-ODF,转化菌株可表达人GST-ODF蛋白,蛋白相对分子质量约为43 000,Western分析证实为GST-sODF融合蛋白.纯化后的表达产物体外培养人外周血淋巴细胞有破骨细胞形成,象牙片上有骨吸收陷窝形成.结论 成功获得人sODF基因cDNA,并在大肠杆菌中表达了人GST-ODF融合蛋白.成功表达的人sODF蛋白有诱导破骨细胞分化的活性,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据.

关键词：破骨细胞分化因子、基因克隆、表达

所属期刊栏目：11

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2007-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：23-26,封三