10.3760/cma.j.cn112141-20220217-00100
miR-154-5p调控CUL2对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用研究
目的:探讨微小RNA 154-5p（miR-154-5p）调控枯灵素2（CUL2）对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用。方法:（1）采用慢病毒转染技术，建立并筛选稳定过度表达miR-154-5p的子宫颈癌SiHa细胞株（miR-154-5p-OE组），以转染慢病毒空载体的SiHa细胞作为对照组（miR-154-5p-CO组），实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测两组细胞中miR-154-5p和CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，测量移植瘤体积。49 d后处死miR-154-5p-OE组和miR-154-5p-CO组裸鼠，剥离移植瘤，采用qRT-PCR技术、蛋白印迹（western blot）法和免疫组化法检测两组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p及CUL2 mRNA和蛋白的表达。（2）建立并筛选miR-154-5p与CUL2同时稳定过度表达的SiHa细胞株（CUL2-OE组），以转染过度表达miR-154-5p载体和空基因序列载体的SiHa细胞作为对照组（CUL2-CO组），进行功能回复实验，qRT-PCR技术检测两组细胞中CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，测量移植瘤体积。（3）将miR-154-5p-CO组和miR-154-5p-OE组带有绿色荧光蛋白（GFP）的SiHa细胞悬液注射于裸鼠尾静脉内，建立裸鼠转移瘤模型，60 d后处死裸鼠，解剖肝、脾、肺、肾、子宫，采用小动物活体光学成像系统检测各器官的GFP信号强度。结果:（1）与对照miR-154-5p-CO组SiHa细胞比较，miR-154-5p-OE组SiHa细胞中miR-154-5p表达水平显著升高（分别为1.00±0.23、22.30±16.29；
t=3.92，
P=0.001），CUL2 mRNA表达水平显著下降（分别为1.00±0.95、0.62±0.07；
t=9.67，
P<0.001）。接种49 d后，与对照miR-154-5p-CO组裸鼠比较，miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤体积显著缩小［分别为（554.6±108.3）、（84.9±47.4）mm
3；
t=4.17，
P<0.001］；miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p表达水平显著升高（
P<0.001），CUL2 mRNA和蛋白的表达水平均显著下降（
P均<0.01）。（2）功能回复实验中，与CUL2-CO组SiHa细胞比较，CUL2-OE组SiHa细胞中CUL2 mRNA表达水平显著升高（分别为1.00±0.17、6.24±0.88；
t=10.13，
P<0.001）。接种31 d后，与对照CUL2-CO组裸鼠比较，CUL2-OE组裸鼠移植瘤体积显著增大［分别为（4.5±0.4）、（18.4±6.5）mm
3；
t=2.64，
P=0.020］。（3）60 d后处死肿瘤转移模型裸鼠，空白组、miR-154-5p-CO组、miR-154-5p-OE组裸鼠的肝、脾、肺、肾、子宫的GFP信号强度分别比较，差异均有统计学意义（
P均<0.001）；且与miR-154-5p-CO组相比，miR-154-5p-OE组裸鼠的肺、子宫的GFP信号强度均显著下降（
P均<0.001）。
结论:miR-154-5p可通过靶向调控CUL2在裸鼠体内发挥抑制子宫颈癌的作用，miR-154-5p可作为子宫颈癌治疗的潜在靶点。
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国家自然科学基金81702583;中国博士后科学基金2019M651072;山西省优秀青年基金201901D211506
2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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