CASC19调控miR-449b-5p表达对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响

摘要：

目的:探讨癌易感性候选基因19（CASC19）调控微小RNA-449b-5p（miR-449b-5p）的表达后对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响。方法:（1）培养子宫颈癌细胞系HeLa细胞，予不同剂量（分别为0、2、4、6、8 Gy）的X线照射，实时荧光定量PCR技术检测HeLa细胞中CASC19 mRNA和miR-449b-5p的表达水平。（2）不同条件处理后HeLa细胞增殖、凋亡、辐射敏感性及其相关蛋白表达的检测，其中，不同处理条件包括沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p、下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达，相关蛋白包括细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）和组蛋白变异体H2AX（γ-H2AX）；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性（以存活分数表示）。（3）采用双荧光素酶报告基因实验（结果以荧光素酶活性表示）和实时荧光定量PCR技术验证CASC19和miR-449b-5p之间的靶向调控关系。结果:（1）随着X线照射剂量（0、2、4、6、8 Gy）的增加，HeLa细胞中CASC19 mRNA的表达水平逐渐升高（
F=502.681，
P=0.000），miR-449b-5p的表达水平逐渐降低（
F=202.936，
P=0.000）。（2）沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p后，HeLa细胞的存活率显著降低（
P<0.05），凋亡率显著升高（
P<0.05），存活分数显著降低（
P<0.05），cyclin D1蛋白的表达水平显著降低（
P<0.05），cleaved-caspase-3和γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（
P<0.05）；下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达后，HeLa细胞的存活率显著升高（
P<0.05），凋亡率显著降低（
P<0.05），存活分数显著升高（
P<0.05），cyclin D1、γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（
P<0.05），cleaved-caspase-3的表达水平显著降低（
P<0.05）。（3）与对照比较，过度表达miR-449b-5p可显著降低CASC19基因野生型HeLa细胞的荧光素酶活性（分别为1.00±0.09、0.37±0.05，
P<0.01），而对CASC19基因突变型HeLa细胞的荧光素酶活性无显著影响（分别为0.92±0.07、0.94±0.05，
P>0.05）。与对照比较，沉默CASC19表达后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著升高（分别为1.00±0.12、4.84±0.49，
P<0.05），过度表达CASC19后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著降低（分别为1.00±0.09、0.38±0.04，
P<0.05）。
结论:HeLa细胞中CASC19可负调控miR-449b-5p的表达，下调miR-449b-5p表达可部分逆转沉默CASC19对HeLa细胞增殖、凋亡及辐射敏感性的影响。

关键词：宫颈肿瘤、RNA，长链非编码、微RNAs、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：55

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：36-44