葡萄糖调节蛋白78基因在卵巢上皮性癌细胞自噬与凋亡中的作用

摘要：

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞自噬与凋亡中的作用及其机制,明确其对卵巢癌细胞生长及顺铂敏感性的影响.方法 以钙选择性螯合剂——BAPTA-AM、钙离子载体-A23187分别下调、上调卵巢癌细胞系SKOV3细胞中GRP78基因的表达,实验分为3组,BAPTA-AM组:加入BAPTA-AM,终浓度为40 μmol/L,作用时间为1 h;A23187组:加入A23187,终浓度为4μmol/L,作用时间为24 h;空白对照组:未加任何药物,作用24 h.(1)采用逆转录(RT)-PCR技术、蛋白印迹(western blot)法分别检测3组细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA和蛋白的表达;(2)荧光染色法检测3组细胞的自噬情况;(3)流式细胞仪检测3组细胞的凋亡情况;(4)3组细胞经不同浓度(100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78 mg/L)顺铂作用后(即为BAPTA-AM+顺铂组、A23187+顺铂组、顺铂组),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定3组细胞对顺铂的敏感性”以50％抑制浓度(IC50)表示”.结果 (1)3组SKOV3细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA和蛋白表达的比较:SKOV3细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA表达水平,BAPTA-AM组分别为0.583 ±0.025、0.860±0.055、0.714±0.032、0.811 ±0.004,A23187组分别为0.840±0.044、0.654±0.065、0.908±0.047、0.620±0.062,空白对照组分别为0.687±0.032、0.772±0.029、0.845±0.018、0.712±0.077;SKOV3细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP蛋白表达水平,BAPTA-AM组分别为0.423±0.035、0.952±0.022、0.385±0.032、0.681±0.095,A23187组分别为0.743±0.032、0.638±0.025、0.596±0.029、0.431±0.095,空白对照组分别为0.617±0.031、0.789±0.083、0.492±0.036、0.531±0.003.SKOV3细胞中beclin1、CHOP mRNA和蛋白表达水平,BAPTA-AM组明显高于空白对照组(P＜0.05),A23187组明显低于空白对照组(P＜0.05);SKOV3细胞中GRP78、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平,BAPTA-AM组明显低于空白对照组(P＜0.05),A23187组明显高于空白对照组(P＜0.05).(2)3组SKOV3细胞自噬情况的比较:BAPTA-AM组、A23187组、空白对照组细胞的荧光强度分别为706±117、473±128、595±126,BAPTA-AM组、A23187组分别与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)3组SKOV3细胞凋亡率的比较:BAPTA-AM组细胞凋亡率为(27.4±2.2)％,明显高于空白对照组”(19.6±1.4)％,P＜0.05”;A23187组细胞凋亡率为(12.2±1.9)％,明显低于空白对照组(P＜0.05).(4)3组SKOV3细胞对顺铂敏感性的比较:BAPTA-AM+顺铂组、A23187+顺铂组、顺铂组细胞对顺铂的IC50分别为(2.00±0.17)、(4.91±2.52)、(3.02±0.62) mg/L,BAPTA-AM+顺铂组、A23187+顺铂组分别与顺铂组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);BAPTA-AM+顺铂组对顺铂的敏感性增加了33.8％,A23187+顺铂组对顺铂的敏感性降低了62.6％.结论 GRP78通过调节beclin1、Bcl-2、CHOP表达而影响卵巢癌SKOV3细胞的自噬与细胞凋亡,进而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,提示GRP78可能成为卵巢癌治疗及提高卵巢癌顺铂敏感性的新靶点.

关键词：卵巢肿瘤、热休克蛋白质类、自噬、细胞凋亡、顺铂

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在线出版日期：2016-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：848-853