二甲双胍对不同分化程度的子宫内膜癌细胞增殖的影响及相关作用机制

摘要：

目的：探讨二甲双胍对不同分化程度的子宫内膜癌细胞增殖的影响及相关作用机制。方法选取高分化子宫内膜癌细胞系Ishikawa和低分化子宫内膜癌细胞系AN3CA细胞。（1）活细胞计数（CCK-8）法检测二甲双胍和表皮生长因子受体（EGFR）信号通路抑制剂——AG1478作用后Ishikawa和AN3CA细胞增殖能力的变化，实验分为3组，二甲双胍组：加入不同浓度（分别为0.01、0.1、1、5、10 mmol/L，为终浓度，下同）的二甲双胍100μl；AG1478组：加入不同浓度（分别为1、5、10、15μmol/L）的AG1478100μl；二甲双胍+AG1478组：加入不同浓度（分别为0.1、1、5 mmol/L）的二甲双胍和不同浓度（分别为1、5、10μmol/L）的AG1478100μl。各组细胞继续培养24、48、72 h后检测其增殖能力的变化。（2）逆转录（RT）-PCR技术检测不同浓度（分别为0.01、0.1、1、5、10 mmol/L）二甲双胍作用24 h后Ishikawa和AN3CA细胞中EGFR mRNA表达水平的变化。（3）蛋白印迹（western blot）法检测二甲双胍（1 mmol/L）作用不同时间（分别为2、4、6、8 h）后Ishikawa和AN3CA细胞中总EGFR、磷酸化EGFR（p-EGFR）和总细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达水平的变化。结果（1）CCK-8法检测显示，不同浓度的药物作用不同时间后，二甲双胍组、AG1478组、二甲双胍+AG1478组对Ishikawa和AN3CA细胞增殖的抑制作用均呈明显的时间-剂量依赖性（P<0.05）；但二甲双胍对Ishikawa细胞增殖的抑制率明显低于AN3CA细胞（P<0.05），而AG1478、二甲双胍+AG1478对Ishikawa细胞增殖的抑制率明显高于AN3CA细胞（P<0.05），且二甲双胍与AG1478联合应用的抑制率明显高于单一药物（P<0.05）。（2）RT-PCR技术检测显示，不同浓度（分别为0.01、0.1、1、5、10 mmol/L）的二甲双胍作用24 h后，Ishikawa细胞中EGFR mRNA的表达水平分别为0.74±0.03、0.61±0.04、0.46±0.03、0.31±0.03、0.23±0.03，AN3CA细胞中EGFR mRNA的表达水平分别为0.79±0.20、0.61±0.03、0.50±0.05、0.32±0.03、0.26±0.04，其抑制作用均呈明显的浓度依赖性（P<0.01）。（3）western blot法检测显示，与未经二甲双胍作用的细胞比较，二甲双胍分别作用2、4、6、8 h后，Ishikawa及AN3CA细胞中总EGFR和总ERK1/2蛋白的表达水平变化不明显，分别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；而p-EGFR及p-ERK1/2蛋白的表达水平均明显降低，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01），且呈明显的时间依赖性（P<0.01）。结论二甲双胍抑制子宫内膜癌细胞的增殖，其抑制作用与癌细胞的分化程度相关；二甲双胍增强AG1478对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用。二甲双胍的作用机制可能通过抑制p-EGFR蛋白从而抑制p-ERK1/2蛋白的表达，进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖。

关键词：子宫内膜肿瘤、二甲双胍、细胞增殖、受体、表皮生长因子、喹唑啉类、酪氨酸磷酸化抑制剂

分类号：R73;R28

资助基金：国家自然科学基金81202070

在线出版日期：2015-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：685-691