雌二醇诱导子宫内膜癌细胞产生的VEGF和bFGF对MAPK通路的影响

摘要：

目的 探讨雌二醇诱导子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞生成的血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中主要基因蛋白的影响.方法 实验分为4组:雌二醇组(E2组,加入1 μmol/L的雌二醇作用30 min),抑制剂组[包括Bibf1120组:加入10 μmol/L的VEGF受体抑制剂——Bibf1120; Ponatinib组:加入2.5 μmol/L的bFGF受体抑制剂——Ponatinib; U0126组:加入10μmol/L的MAPK激酶(MEK)特异性抑制剂——U0126.各组均预处理1 h],抑制剂+E2组(包括Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组和U0126+E2组,各抑制剂预处理1h后,加入1μmol/L的雌二醇作用30 min);对照组(仅加入无血清DMEM培养基).(1)以不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100μmol/L)雌二醇作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白活化水平.(2)采用荧光定量PCR技术检测各组细胞中VEGF、bFGF、MEK1/2、ERK1/2mRNA的表达,蛋白印迹法检测各组细胞中VEGF、bFGF蛋白的表达及磷酸化NEK1/2(p-MEK1/2)、p-ERK1/2蛋白活化水平,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期比例,体外穿膜实验检测各组细胞的迁移能力.结果 (1)不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100 μmo1/L)的雌二醇作用30 min后Ishikawa细胞中p-ERK1/2蛋白的活化水平分别为0.16±0.03、0.10±0.03、0.41±0.04、0.19±.0.03、0.19±0.03,均明显高于对照组的0.05±0.00 (P＜0.05),且雌二醇浓度为1μmol/L时其活化水平最高.(2)E2组细胞中VEGF、bFGF mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);Bibf1120+E2组细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达水平分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).E2组MEK1/2、ERK1/2mRNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平均显著高于对照组(P＜0.05);Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组、U0126+E2组细胞中MEK1/2、ERK1/2mRNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平均低于E2组(P＜0.05).E2组G1期及S期细胞比例分别为(53.6±3.2)％和(29.2±4.2)％,分别与对照组的(65.1±2.6)％和(20.2±1.9)％比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组、Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组G1期细胞比例分别为(66.8±2.6)％、(63.1±2.6)％和(63.3±0.4)％,S期细胞比例分别为(25.4±1.9)％、(25.0±3.8)％和(23.8±0.5)％,分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组分别与Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).E2组穿过微孔的细胞数为(110±17)个,与对照组的(65±8)个比较,差异有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组、Bibf1 120+E2组、Ponatinib+E2组穿过微孔的细胞数分别为(28±4)、(38±5)、(42±6)个,分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组分别与Bibf1 120+E2组、Ponatinib+E2组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).结论 雌二醇通过非基因转录效应产生的VEGF、bFGF可以激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发生、发展.

关键词：子宫内膜肿瘤、细胞系、肿瘤、血管内皮生长因子A、成纤维细胞生长因子2、丝裂原激活蛋白激酶类、雌二醇

所属期刊栏目：49

分类号：R737.33;R285.5;R329.28

资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金

在线出版日期：2015-01-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：925-931