胸腺活化调节趋化因子及其受体在早孕绒毛组织中的表达特征及生物学功能

摘要：

目的 探讨早孕绒毛组织中胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其特异性受体4(CCR4)的表达特征及生物学功能.方法 收集正常早孕(孕6～8周)妇女人工流产术后的绒毛组织,采用逆转录(RT) PCR技术检测TARC、CCR4的mRNA表达水平；免疫组化法检测TARC、CCR4的蛋白表达水平.原代分离、培养绒毛外细胞滋养细胞,免疫荧光法检测TARC、CCR4蛋白在细胞水平的表达；体外侵袭实验检测不同浓度(10、25、50、100 ng/ml)的重组蛋白TARC(rhTARC)与无血清RPMI 1640培养基(对照组)对绒毛外细胞滋养细胞系HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响；阻断试验检测TARC对细胞侵袭能力影响的特异性,实验分4组:对照组、100 ng/ml rhTARC组、100 ng/mlrhTARC+ 20 μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rhTARC+ 20 μg/ml IgG组,检测各组HTR8/SVneo细胞的侵袭能力变化；蛋白印迹法检测100 ng/ml rhTARC组整合素α5及整合素β1蛋白表达水平.结果 (1)体内试验:人早孕绒毛组织中均有TARC及CCR4 mRNA的表达；TARC蛋白主要表达于细胞滋养细胞、合体滋养细胞及滋养层柱的远端,CCR4蛋白特异性地表达于绒毛外间质细胞滋养细胞.(2)体外试验:①免疫荧光法检测显示,TARC、CCR4蛋白在绒毛外细胞滋养细胞中的表达均呈阳性；②体外侵袭实验显示,HTR8/SVneo细胞经10、25、50、100 ng/ml浓度的rhTARC处理后,细胞的侵袭能力逐渐增加,穿膜细胞数分别为(142±31)、(161 ±46)、(201 ±30)、(312 ±48)个,对照组为(117±33)个,与25 ng/ml rhTARC处理时的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(P ＜0.05)；100 ng/ml的rhTARC处理时,侵袭能力达高峰(P＜0.01)；③阻断试验结果显示,100 ng/ml rhTARC组、100 ng/mlrhTARC+ 20 μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rhTARC+ 20 μg/ml IgG组和对照组侵袭到小室对侧的细胞数分别为(313±47)、(113 ±41)、(287±75)、(128 ±23)个；④免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,100 ng/ml rhTARC组整合素α5的蛋白表达水平明显升高,整合素β1的蛋白表达水平也有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.01,JP＜0.05).结论 TARC特异性地表达于人早孕绒毛,并通过上调整合素α5及整合素β1的蛋白表达增加滋养细胞的侵袭能力,可能在滋养细胞分化及胎盘形成过程中发挥重要作用.

关键词：妊娠初期、绒毛膜绒毛、趋化因子CCL17、受体、CCR4

所属期刊栏目：48

分类号：R737.9;R392.12;R994.6

资助基金：国家自然科学基金;北京市科技新星计划

在线出版日期：2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：421-426