survivin基因修饰后对卵巢上皮性癌HO-8910细胞周期及化疗敏感性的影响

摘要：

目的 探讨survivin基因经不同方式基因修饰后对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系HO-8910细胞周期和化疗敏感性的影响.方法 对survivin基因进行两种方式的基因修饰,即survivin基因核苷酸序列第34位苏氨酸突变为丙氨酸(T34A)和N末端缺失8个氨基酸(N-8AA),构建含survivinN-8AA和survivinT34A基因的表达载体,将含survivinN-8AA、survivinT34A和野生型survivin基因的表达载体转染HO-8910细胞(分别为SN-HO-8910组、M-HO-8910组和Sur-HO-8910组),以转染空载体pcDNA3.1质粒(PC-HO-8910组)为对照.(1)采用逆转录(RT)PCR技术检测和测序法鉴定转染后HO-8910细胞各目的 基因mRNA的表达;(2)采用流式细胞仪检测各组转染后HO-8910细胞的细胞周期比例;(3)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组转染后HO-8910细胞对顺铂、紫杉醇和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--LY294002的敏感性[以50%抑制浓度(IC50)表示].结果 (1)RT-PCR技术检测和测序法鉴定结果显示,转染后的HO-8910细胞分别稳定表达survivinT34A、survivinN-8AA和野生型survivin mRNA.(2)SN-HO-8910组细胞G0/G1期比例为44.72%,明显低于PC-HO-8910组的49.64%(P＜0.05);而G2/M期和S期比例(分别为1.06%和54.22%)明显高于PC-HO-8910组(分别为0.56%和49.80%;P＜0.05).M-HO-8910组细胞G2/M期和S期比例分别为0.16%和36.33%,明显低于PC-HO-8910组(P＜0.05);而G0/G1期比例(63.51%)明显高于PC-HO-8910组(P＜0.05).Sur-HO-8910组G0/G1期、G2/M期和S期比例分别为54.46%、0.62%、44.92%,分别与PC-HO-8910组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)Sur-HO-8910组细胞对顺铂和紫杉醇的IC50[分别为(20.4±6.1)和(36.7±4.0)μmol/L]均明显高于PC-HO-8910组[分别为(14.4±3.9)和(28.6±3.6)μmol/L;P＜0.05].SN-HO-8910组细胞对顺铂和LY294002的IC50[分别为(7.6±1.0)和(13.2±4.0)μmol/L]均明显低于PC-HO-8910组[分别为(14.4±3.9)和(41.0±7.9)μmol/L;P＜0.01],而对紫杉醇的IC50[(37.9±4.8)μmol/L]明显高于PC-HO-8910组(P＜0.05).M-HO-8910组细胞对顺铂的IC50[(9.9±1.2)μmol/L]明显低于PC-HO-8910组(P＜0.05),而对LY294002的IC50[(66.9±4.8)μmol/L]明显高于PC-HO-8910组(P＜0.01).结论 survivin基因行缺失N-8AA和突变T34A修饰后,使细胞周期分别向G2/M期、S期及G0/G1期移行.survivinN-8AA比survivinT34A更为显著地介导了顺铂和LY294002诱导的细胞毒作用,提示这可能与survivin基因功能的细胞周期依赖性以及不能形成活性二聚体有关.

关键词：微管相关蛋白质类、卵巢肿瘤、细胞系、肿瘤、细胞周期、顺铂、色酮类、吗啉类

所属期刊栏目：45

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：四川省医学重点学科建设项目川卫办发[2007]407号;四川省科技厅应用基础研究项目2006J13-132

在线出版日期：2010-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：860-864