原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

摘要：

目的 研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮件癌(卵巢痛)细胞,筛选并鉴定卵巢癌千细胞样细胞.方法 卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺痛Ⅲ期、细胞分化2级的患者,分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞,并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞.应用定量PCR技术检测球样细胞团细胞表达干细胞标志基因的情况,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性,并榆测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性.结果 在无血清添加细胞因子的培养条件下,原代卵巢癌细胞形成球样细胞团,这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能.球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD_(133)、CD_(117)及ABCG2等干细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14～400倍.球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性,将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72 h后,球样细胞团细胞抑制率为31%、29%,显著低于分化细胞(抑制率为61%、73%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).球样细胞团细胞中Hoechst 33342染色阳性的细胞比例为21.83%,而贴壁细胞为83.04%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).500个球样细胞闭细胞可在裸鼠体内成瘤,肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似,且高表达上皮性肿瘤标志物CA_(125)和细胞角蛋白7.结论 采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞,可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞样细胞,并具有干细胞的功能.

关键词：卵巢肿瘤、肿瘤干细胞、肿瘤细胞、培养的、培养基、无血清

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分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：上海市科学技术委员会浦江人才计划07pj14090;上海市科学技术委员会医学引导项目09411968300

在线出版日期：2010-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：936-940